法医物证学实验教案实验一dna提取

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1、新乡医学院教案首页课程名称法医物证学实验授课题目实验一DNA提取授课对象03级法伏专业时间分配2007-3-1314：30-21：00课时目标掌握酚/氯仿法、Chelex-100快速抽提法提取半物检材DNA。授课重点酚/氯仿法、Chelex-100快速抽提法授课难点酚/氯仿法提取生物检材DNA授课形式实验课授课方法讲解、示教参考文献法医物证学实验指导思考题1.比较三种DNA捉取方法的优缺点。2•精斑提取DNA采用二步消化法的原理和注意事项有哪些？教研室主任及课程负责教研室主任（签字）课程负责人（签字）人签字年月日年月日新乡医学院实验课教案课程名称：法医物证学基

2、本内容教学手段和教学组织实验准备:1•仪器设备：0.5/1.5mlEPt，各种规格移液器、离心机、实验准备尽剪刀、水浴锅。可能充分，包2•试剂：括各种器材。5%chelex-100：称取5gchelex-100,加高压灭菌ddH2O100mlo10mg/ml的蛋白酶K20mmol/L的DTT一、酚/氯仿法源理］真核细胞在去垢剂SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K作用下消化破裂真核细胞膜与核膜，核蛋白质变性并降解，释放DNA。通过有机溶剂酚和氯仿，除去蛋白成分，讲解实验原用乙醇沉淀收集DNAo理，回顾课本［操作］知识。(-)新鲜血液:1.溶血演示实验。2.消化3D

3、NA捉取新乡医学院实验课教案课程名称：法医物证学基本内容教学手段和教学组织4.沉淀DNA5.溶解DNA讲解检材种（二）血痕类、要求。1•取血纱约5X5mm2,剪碎后置于1.5ml离心管中。2.以下步骤同（…）2〜5。（三）唾液（斑）或口腔拭子：1・唾液斑或口腔拭子细胞洗脱2.以下步骤同（一）2~5。（四）精液（斑）DNA提取：不同检材处1.精液（斑）预处理2•消化理方法。3.以下步骤同（一）3~5。（五）毛根：1.毛发预处理2.消化：放登55°C水浴3h或37°C孵育过夜。3.以F步骤冋（…）3〜5。（六）毛干线粒体DNA提取：1.毛干清洗2.消化：37°C温

4、浴消化过夜。3.以下步骤同（一）3〜5。新乡医学院实验课教案课程名称：法医物证学基本内容教学手段和教学组织［注意事项］1.提取过程中应缓慢上下转动试管混匀，切总动作粗暴，以免人为打断DNA分子。2.毛发、骨骼、指甲等检材作DNA抽提时，要尽量使用活性好的蛋白酶K。配置的蛋白酶K应在短时间内用完，暂时不用时要放于4°Co3.酚和氯有强腐蚀性，可对皮肤、粘膜、眼睛等造成损伤。氯仿极易挥发，易燃易爆，具有麻醉作用及神经毒性，操作吋必须戴手套。一、Chelex-100快速抽提法［原ffl］Chelex-100是一种螯合树脂，由苯乙烯、二乙烯苯多聚体组成，含有成对的亚氨

5、基二乙酸盐离子，起着螯合基团的作用。对多价金属离子有极强亲和力。在低离子强度、碱性及100°C煮沸条件下，可以使细胞膜裂解，并使与DNA结合的蛋白质变性，游离DNA。Chelex-100螯合剂吸附了金属离了后，能够抑制核酸酶对DNA的消化作用。强调注意事项。新乡医学院实验课教案课程名称：法医物证学基本内容教学手段和教学组织［操作］详细讲解新鲜血：Chelex-100提1.裂解红细胞取方法。2.重复步骤(1)；2.加5%Chelex-100约200pl,56°C孵育0.5〜2h。3.98°C孵育8〜10min,旋涡振荡5〜10s；4.10000rpm离心2min

6、,取上清液作PCR扩增反应。［注意事项］1.本法仅适用于PCR反应模板的制备，DNA模板的保存时间较酚/氯仿法短。强调注意事2.操作中振荡步骤需要充分。项。3.可根据检材情况适当延长56°C孵育时间。4.煮沸(98°C)过程很关键，温度、时间要足够。5.Chelex-100放置后会沉淀，使用、扩增前应混匀后再离心，取上清液。PCR反应体系内绝对不能含有Chelex-100树脂颗粒。