法医物证学实验教案实验三pcr-str分型技术

《法医物证学实验教案实验三pcr-str分型技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、新乡医学院教案首页课程名称法医物证学实验授课题冃实验三PCR-STR分型技术授课对象03级法伏专业时间分配2007-3-2714：30-21：00课时目标掌握PCR-STR银染分型技术及实验结果分析，白动分型技术。了解PCR-STR授课重点PCR-STR银染分型技术及实验结果分析授课难点PCR-STR银染分型技术授课形式实验课授课方法讲解、示教参考文献法医物证学实验指导1.STR-PCR分型方法有哪些？思考题2.STR-PCR分型技术在法医学中应用有哪些优点？教研室主任教研室主任（签字）课程负责人（签字）及课程负责人签字年月日年月日新乡医学院实验课教案课

2、程名称：法医物证学基本内容教学手段和教学组织实验准备:1.仪器设备实验准备尽PCR扩增仪、电泳仪、电泳银染系统可能充分，包2•试剂括各种器材。超纯水、TaqDNA聚合酶、引物（D5S818）、dNTP、基因组DNA、6%聚丙烯酰胺凝胶、10%APS、TEMED、10%乙醇、1%硝酸、AgNO3溶液、显色液10%冰乙酸、甲酰胺、6Xloadingbuffer>GS500。一、PCR扩增D5S818：forward:5*-GGTGATTTTCCTCTTTGGTATCC-3*讲解实验原reverse:5*-AGCCACAGTTTACAACATTTGTATCT-

3、3*理，回顾课本l.PCR混合液准备：知识。1）反应体系含有成份（见下表）:2）计算所需要试剂的量:每一反应管所需的量X（所要分析演示实验。的样品数+3）。多出新乡医学院实验课教案课程名称：法医物证学基本内容教学手段和教学组织的3份是：一份用于阳性对照，一份用于阴性对照；另一讲解检材种份用于补偿加样过程屮的损失。类、要求。3)PCR混合液加样顺序：超纯水、10X缓冲液、引物、TaqDNA聚合酶。2.标记反应管,每一反应管中分装入20pl的PCR混合液。3.按照标记加入5plDNA提取液，同时加5

4、11超纯水到阴性对照管屮，加5pl已知STR分型的DNA到

5、阳性对照管中。关闭管盖，瞬时离心数S。强调灌胶中三、扩增产物的分离：中性聚丙烯酰胺凝胶电泳(06%,的注意事项。T=3.3%)(polyacrylamidegelelectrophoresis)1•选板2.擦板3.装板与封边4.配胶5.灌胶6.聚胶7.配制电极缓冲液&安装电泳槽9.上样及电泳新乡医学院实验课教案课程名称：法医物证学基本内容教学手段和教学组织注意事项1.PCR各环节均要有防止污染的观念，并同时设立阳性与阴性（空白）对照进行监测。2.TaqDNA聚合酶使用时要在冰浴中操作，使用后要及时放入-20°C冰箱保存。3.保证凝胶聚合均匀的最佳温度为2

6、3〜25°C,温度降低会明显减慢凝胶聚合，相反温度升高会加速凝胶聚合。4.增加APS或TEMED用量，将使丙烯酰胺聚合链长度缩短，凝胶变得脆弱而失去柔性。5.TEMED极易被氧化而失去催化能力，试剂中若污染有氧化剂杂质，溶液呈黄色。如果无法得到无色透明的试剂，只有适当增加用量以保证凝胶聚合速度。APS容易吸潮，溶解于水后很快降解并失效，所以APS应避光、干燥、密封条件下保存，溶液要新鲜配置，4°C条件下保存不宜超过一周。6•显色液需新鲜配制，棕色瓶保存。强调注意事项。