法医物证学实验教案实验四其它法医dna检验

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1、新乡医学院教案首页课程名称法医物证学实验授课题目实验四其它法医DNA检验授课对象03级法伏专业时间分配2007-4-314：30-21：00课时目标掌握Amelogenin基因的性别测定、X、Y染色体STR基因的性别鉴定技术及实验结果分析。授课重点X、Y染色体STR基因的性别鉴定技术授课难点X、Y染色体STR基因的性别鉴定技术授课形式实验课授课方法讲解、示教参考文献法医物证学实验指导思考题1.进行性别鉴定的原理是什么？2.还有那些方法能进行性别鉴定？教研室主任及课程负责教研室主任（签字）课程负责人（签字）人签字年月日年月日新乡医学院实验课教案课程名称：法医物证学基本内容教学手段和教

2、学组织、Amelogenin基因的性别测定［原理］人类牙釉质蛋白Amelogenin的基因为X染色体与Y实验准备尽染色体所共有，由于存在不同的碱基缺失，人类AmelX可能充分，包与Amel—Y的内含子长度不同。针对Amelogenin基因碱括各种器材、基缺失部位两侧的X、Y染色体同源序列设计引物，PCR引物。扩增X、Y特异性片段表现出长度差异，据此可进行性别鉴定。本实验是通过扩增Amelogenin基因第一内含子片段检测X、Y特异性片段进行性别鉴定。（一）DNA提取（二）引物序列5YCCTGGGCTCTGTAAAGAATAGTG-3'5AYCAGAGCTTAAACTGGGAAGCT

3、G-3r（三）DNA扩增讲解实验原（四）扩增产物分析理，回顾课本一、X、Y染色体STR基因的性别鉴定知识。［原理］X和Y染色体属人类性染色体，男性为XY,女性为XXo检测X染色体上的STR基因座，正常男性个体有新乡医学院实验课教案课程名称：法医物证学基本内容教学手段和教学组织一个等位基因表现为一条带；女性有一对等位基因，杂合讲解扩增种表现为二条带，纯合则为一条带。正常男性拥有Y染色体，类、要求。女性没有。故采用Y染色体上的STR基因座分型时，男性标本可以检出，一般为一条带。本实验是通过扩增X染色体上DXS7130基因座和Y染色体上DYS456基因座，以用于进行性别或法医学中特殊案例

4、鉴定。引物序列DXS7130:强调灌胶中Forward:5r-ATAGAGGAAGGGGAAATCAT-3r的注意事项。Reverse:5-CTGGGAAAGAACAAAGCAAG-3'DYS456：Forward:5r-CCCATCAACTCAGCCCAAAAC-3'Reverse:5'・GGAACCTTGTGATAATGTAAGATG-3'注意事项1.作聚丙烯酰胺凝胶银染分析时，注意该位点扩增片段较新乡医学院实验课教案课程名称：法医物证学基本内容教学手段和教学组织小，电泳时容易在较短时间跑出凝胶。2.阴道液斑检测出X、Y两条片段时，说明有男性成分。三、线粒体DNA分型技术(Th

5、etechniqueformtDNAtyping)［目的和要求］掌握线粒体DNA分型及其法医学意义［原理］人类线粒体DNA(mtDNA)是存在于细胞核外的环状双链DNA分子，大小为16569bp,其序列在个体之间存在着差异，这些差异主要分布于非编码区D环附近，如HV1区、HV2区。通过对mtDNA的序列分析可以检测岀这些差异，协助进行个体识别和亲缘鉴定。引物序列根据SullivanKM等人的报道，使用下述引物对线粒体DNAHVI区的3318至3430间的DNA片段进行扩增：L3318:5,-CCAACCTCCTACTCCTCATTG-3,H3430:5'・TGGGACCTTTGCG

6、TAGTTGTA-3f酶切取10卩1以上纯化的PCR产物，加入内切酶Haelll,37°C恒温箱放置12h,取出后琼脂糖电泳。强调注意事项。