抗牛布氏杆菌单克隆抗体的制备及celisa检测试剂盒研制

《抗牛布氏杆菌单克隆抗体的制备及celisa检测试剂盒研制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、．．，．－－＇．．心心户－：－振＾巧：濟．＇：ｖ＊＇扛ｒ＇＾ｒｒ、。、？■’－＾心一．＇一公＾％：户戶ｘ－＇ｈ心、．ｖ＾：巧石‘一＇－－＾＇．令若类号Ｖ■学号Ｍ１２０５００＊会？，。ＤＣ密级金赛―萝？：為淨ｆ己＇‘。’？＇＂－於乐－１Ｖ孝’Ｖ‘哪＾：．＇考巧絶＿４＾袭繁争叫大聲皆５－’、‘－＇－＇＂＾：－：為＜户忠：＾或若户’黃硕去学隹备丈＇、＊，？＾、占心－Ｔ戸＇＇ｙ：八＾（学术型）．．也＾—一＊，？、＊＊－Ｗｖ－？一－？二

2、＾＇。＇－一，’’？－＇＇－＇、＾公峡；．＇＞亢牛布氏杆菌单克隆抗体的制备及ｃＥＬＩＳＡ检测试剂盒研制Ｖ又’王志明－寺．户＞遠＾－－：２２５００９指导教师姓名；秦爱建教！受，扬州大学，江苏拐州，＾Ｋ＼＇申请学位级别：硕壬学科专业名称；预防兽医学－．少令、论文提交日期：２０１５年４月论文答辩日期：２０１５年６月４日学位授予单位－＼＝扬州大学学位授予日期＝２０１５年６月３０日Ｊ＾答辩委员会主席：郭爱珍教授言、’２０１５年６月、＾ｉｒ式－；ＡＪ乂．、．’八．峡六－，每略及今

3、：＇變（乾系一道變扛妾．：－、．’芝二璋—－，乏與气巧—？＇．巧號或乂巧巧追宏＼ｒ二抗牛布氏杆菌单克隆抗体的制备及ｃＥＬ扮Ａ检测试剂盒研制ＤｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄａａｉｎｓｔＢｏｖｉｎｅｐｙｇＢｒｕｃｅｌｌａｅｌｌｏｓｉｓａｎｄｉｔｓｃＥＬＩＳＡｋｉｔ’硕±生？：王志明导师；秦爱建教授专业：预防兽医学资助项目：江苏省优势学科项目江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州大学２０１５年６月ＬＩ王志明ＩＳＡ：抗牛布氏杆菌单克隆抗体的

4、制备及ｃＥ检测试剂盒的研制抗牛布氏杆菌单克隆抗体的制备及ｃＥＬＩＳＡ检测试剂盒的研制硕±生；王志明导师：秦爱建教授摘要布氏杆菌病（Ｂｍｃｅｌｌａｅｌｌｏｓｉｓ）也称布鲁菌病（布病），是由布氏杆菌感染引起的一种最为常见的人兽共患传染病之一，其中又Ｗ牛种和羊种布氏杆菌最为严重。布氏杆菌被列为必须报舍病原体，除了少数己经根除布病的国家，布病广泛一地分布于世界各地，我国也是布病流行极为严重的国家之。最近几年，布病在世界范围内呈反弹趋势，给公共卫生安全及畜牧业发展而带来了巨ｉ的经济损。失，布病防控形势十分严峻由于目

5、前尚未有理想的治疗药物，因此对布病的准确诊断是预防该病的关键。目前对布病的检测方法主要是血清学方法，包括试管凝集试验（ＳＡＴ）、虎红平板凝集试验（ＲＢＰＴ）、补体结合试验（ＣＦＴ）、聚合酶链式反应（ＰＣＲ）和巧光偏振免疫分析法（ＦＰＩＡ）等。但是由于布氏杆菌的脂一些革兰阴性菌多糖（ＬＰＳ）与另外，特别是耶尔森菌０９和大肠杆菌０１５７表面的ＬＰＳ的结构存在相似成分，因此在检测中往往会发生交叉反应而出现假阳性的检测结果。鉴于此，本研究制备了具有特异性的抗牛种布氏杆菌的单克隆抗体，并且利用该单克隆抗体建立了检测布氏杆菌抗体的竞

6、争酪联免疫吸附试验（沈ＬＩＳＡ）方法，通过与商品化布病检测试剂盒的比较，证明本研究的烟ＬＩＳＡ方法能够有效地排除Ｗ耶尔森菌０９和大肠杆菌０１５７为代表的典型革兰氏阴性菌引起的假阳性的结果，在布病根除计划中将具有重要应用价值。２扬州大学硕±学位论文１．抗布氏杆菌单克隆抗体的研制及特性鉴定本研究用灭活的牛种布氏杆菌Ｓ２３０８免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，按常规方法免疫Ｈ。次后进斤加强免疫，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合将牛种布氏杆菌Ａ９９、耶尔森菌０９和大肠杆菌０１５７分别包被酶标板，用间接酶联免疫吸附试验（旧ＬＩ

7、ＳＡ）对杂交瘤细胞进行筛选，结果获得２株稳定分泌抗布氏杆菌抗体的ｃｅ－Ｂ－杂交瘤细胞株Ｂｍｌｌａ５Ｃ１０和ｒｕｃｅｌｌａ４Ｄ２。对该２株杂交瘤进行特性分析，结ｒｕｃｅａ－－：ｒｕｃｅａ果表明，Ｂｌｌ５Ｃ１０腹水效价为１６４０００，亚类鉴定为ＩｇＧ３从Ｂｌｌ４Ｄ２；Ｉ２腹水效价为１：３２０００，亚类鉴定为Ｇ３／Ｘ。试管凝集试验结果表明ｇ，株单克隆抗体与牛种布氏杆菌Ｓ２３０８、牛种布氏杆菌Ａ９９、羊种布鲁氏菌１６Ｍ能发生较强凝集作用９、５７。；而与耶尔森菌０大肠杆菌０１无明显凝集现象免疫印迹法ｅｓ－（Ｗｔｅｒｎｂｌｏｔ）结果显示

8、，该２株单克隆抗体与布氏杆菌菌体蛋白具有明显反应性，而与耶尔森菌０９、大肠杆菌０１５７无明显反应。本研究所获得的２株单