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时间:2019-03-20
《抗牛布氏杆菌单克隆抗体的制备及celisa检测试剂盒研制》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、..,.--'..心心户-:-振^巧:濟.':v*'扛r'^rr、。、?■’-^心一.'一公^%:户戶x-'h心、.v^:巧石‘一'--^'.令若类号V■学号M120500*会?,。DC密级金赛―萝?:為淨f己'‘。’?'"-於乐-1V孝’V‘哪^:.'考巧絶_4^袭繁争叫大聲皆5-’、‘-'-'"^:-:為<户忠:^或若户’黃硕去学隹备丈'、*,?^、占心-T戸''y:八^(学术型)..也^—一*,?、**-Wv-?一-?二
2、^'。'-一,’’?-''-'、^公峡;.'>亢牛布氏杆菌单克隆抗体的制备及cELISA检测试剂盒研制V又’王志明-寺.户>遠^--:225009指导教师姓名;秦爱建教!受,扬州大学,江苏拐州,^K\'申请学位级别:硕壬学科专业名称;预防兽医学-.少令、论文提交日期:2015年4月论文答辩日期:2015年6月4日学位授予单位-\=扬州大学学位授予日期=2015年6月30日J^答辩委员会主席:郭爱珍教授言、’2015年6月、^ir式-;AJ乂.、.’八.峡六-,每略及今
3、:'變(乾系一道變扛妾.:-、.’芝二璋—-,乏與气巧—?'.巧號或乂巧巧追宏\r二抗牛布氏杆菌单克隆抗体的制备及cEL扮A检测试剂盒研制DevelomentofMonoclonalAntibodaainstBovinepygBrucellaellosisanditscELISAkit’硕±生?:王志明导师;秦爱建教授专业:预防兽医学资助项目:江苏省优势学科项目江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州大学2015年6月LI王志明ISA:抗牛布氏杆菌单克隆抗体的
4、制备及cE检测试剂盒的研制抗牛布氏杆菌单克隆抗体的制备及cELISA检测试剂盒的研制硕±生;王志明导师:秦爱建教授摘要布氏杆菌病(Bmcellaellosis)也称布鲁菌病(布病),是由布氏杆菌感染引起的一种最为常见的人兽共患传染病之一,其中又W牛种和羊种布氏杆菌最为严重。布氏杆菌被列为必须报舍病原体,除了少数己经根除布病的国家,布病广泛一地分布于世界各地,我国也是布病流行极为严重的国家之。最近几年,布病在世界范围内呈反弹趋势,给公共卫生安全及畜牧业发展而带来了巨i的经济损。失,布病防控形势十分严峻由于目
5、前尚未有理想的治疗药物,因此对布病的准确诊断是预防该病的关键。目前对布病的检测方法主要是血清学方法,包括试管凝集试验(SAT)、虎红平板凝集试验(RBPT)、补体结合试验(CFT)、聚合酶链式反应(PCR)和巧光偏振免疫分析法(FPIA)等。但是由于布氏杆菌的脂一些革兰阴性菌多糖(LPS)与另外,特别是耶尔森菌09和大肠杆菌0157表面的LPS的结构存在相似成分,因此在检测中往往会发生交叉反应而出现假阳性的检测结果。鉴于此,本研究制备了具有特异性的抗牛种布氏杆菌的单克隆抗体,并且利用该单克隆抗体建立了检测布氏杆菌抗体的竞
6、争酪联免疫吸附试验(沈LISA)方法,通过与商品化布病检测试剂盒的比较,证明本研究的烟LISA方法能够有效地排除W耶尔森菌09和大肠杆菌0157为代表的典型革兰氏阴性菌引起的假阳性的结果,在布病根除计划中将具有重要应用价值。2扬州大学硕±学位论文1.抗布氏杆菌单克隆抗体的研制及特性鉴定本研究用灭活的牛种布氏杆菌S2308免疫BALB/C小鼠,按常规方法免疫H。次后进斤加强免疫,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合将牛种布氏杆菌A99、耶尔森菌09和大肠杆菌0157分别包被酶标板,用间接酶联免疫吸附试验(旧LI
7、SA)对杂交瘤细胞进行筛选,结果获得2株稳定分泌抗布氏杆菌抗体的ce-B-杂交瘤细胞株Bmlla5C10和rucella4D2。对该2株杂交瘤进行特性分析,结rucea--:rucea果表明,Bll5C10腹水效价为164000,亚类鉴定为IgG3从Bll4D2;I2腹水效价为1:32000,亚类鉴定为G3/X。试管凝集试验结果表明g,株单克隆抗体与牛种布氏杆菌S2308、牛种布氏杆菌A99、羊种布鲁氏菌16M能发生较强凝集作用9、57。;而与耶尔森菌0大肠杆菌01无明显凝集现象免疫印迹法es-(Wternblot)结果显示
8、,该2株单克隆抗体与布氏杆菌菌体蛋白具有明显反应性,而与耶尔森菌09、大肠杆菌0157无明显反应。本研究所获得的2株单
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