牛布氏杆菌病的诊断方法.pdf

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1、现代畜牧科技２０１７年第１期总第２５期·１２３·ｄｏｉ：１０．１９３６９／ｊ．ｃｎｋｉ．２０９５－９７３７．２０１７．０１．１１５牛布氏杆菌病的诊断方法段莹莹（黑龙江省牡丹江市动物卫生监督所，黑龙江牡丹江１５７０００）摘要：患有布氏杆菌病的牛可引发流产，并向外传播病毒，通过黏膜、伤口传染给其他健康牛，还可传染给人类，给养殖业及其从业人员带来极大的危害，所以及时诊断并采取措施对于该病有着重要意义。关键词：牛；布氏杆菌病；诊断中图分类号：Ｓ８５８．２３文献标识码：Ｂ文章编号：２０９５－９７３７（２０１７）０１－０１２３－０１牛布氏杆菌病的

2、发生，可根据牛群的流产情况和病牛的优点是可以克服病理材料被杂菌污染所造成的困难，因为无临床症状来判定。如果牛群中有大批怀孕母牛流产，流产后病原性的杂菌进入豚鼠体内之后很快就被消灭，不影响布氏有胎衣滞留、关节炎等症状，流产胎儿和胎盘又有布氏杆菌杆菌的分离，而用直接培养方法有时不易做到这一点。病所特有的病变时，就应怀疑有布氏杆菌病发生。如果牛群通常以胎儿组织或胎盘组织的乳剂、阴道洗液或全奶作一向很少流产，只是由外地引进新牛之后不久才发生大批流接种材料，剂量在１～３ｍＬ，皮下注射。检验牛奶时，可注射产，更有怀疑是布氏杆菌病。在没有实验室设备

3、而又要采取后数天，取同一母牛的奶给该豚鼠做第二次注射，以增加感及时预防的措施的场合下，根据流行情况和临床症状来诊断染的机会。接种后３～５周，即可剖杀，取淋巴结和脾作为分布氏杆菌是非常必要的，但不能据此作出最后的诊断，因为离培养。剖杀前还可做变态反应和凝集反应实验。实验证还有许多原因可以使母牛发生流产。明，豚鼠于人工感染之后，凡出现阳性或可疑变态反应和凝１细菌学诊断集价在１∶５以上的都可分离出布氏杆菌。因此，只要接种到豚鼠出现凝集反应和变态反应，就应认为已被感染。通常取流产胎儿、胎盘、阴道分泌物和奶汁作为细菌学检查。检查时可采用显微镜检

4、查或做布氏杆菌的分离培养。２血清学和变态反应诊断１．１显微镜检查我国目前以凝集反应和变态反应作为诊断牛布氏杆菌牛发生布氏杆菌性流产时，胎盘绒毛膜的表面，特别是病的基本方法。试管凝集实验在我国应用已久，目前仍是检在水肿区的边缘，还有大量布氏杆菌。取这些组织制成涂查牛布氏杆菌病的主要手段，也是国际上诊断牛布氏杆菌病片，用鉴别染色法染色或用改良染色法镜检，即可在上皮细的重要方法。我国生产的布氏杆菌凝集抗原，是按照联合国胞中看到布氏杆菌，有时在细胞外也可以看到。世界卫生组织和粮农组织布氏杆菌病专家委员会规定的标１．２分离布氏杆菌准标定的，其应

5、用液对国际标准布氏杆菌阳性血清的凝集价涂片检查仅仅是初步的细菌学诊断，通常仍需从流产胎将为１∶１０００。但凝集试验有其局限性，在没有布氏杆菌病儿，特别是胎儿胃液，奶和阴道分泌物中分离布氏杆菌。分的地区或牛群中，常由于感染其他病菌而出现非特异反应，离的方法可采用直接培养或接种豚鼠。这给实验结果的判定造成不少困难。注射布氏杆菌苗的犊１．２．１直接培养牛和成年牛，有些凝集反应长期不消失，这也使凝集试验的检验没有杂菌污染的材料时，例如胎儿胃液，可将材料应用受到一定的限制。由菌苗和其他原因引起的非特异凝直接接种于含有１０％马血清的马丁琼脂斜面。

6、检验牛奶、阴集反应，主要是由于大分子的抗原作用。可用以下几种方法道分泌物或有其他杂菌污染的材料时，则需用选择性培养消除这种抗原的干扰作用。基，常用的选择性培养基是，在每１００ｍＬ常用来培养布氏杆酸性布氏杆菌抗原试验。大分子抗体在酸性溶液中受菌的培养基，含马血清的马丁琼脂或肝汤琼脂中，加入放线到抑制，继用ｐＨ值３．６的缓冲液配制酸性抗原，细菌浓度菌酮１０ｍｇ，杆菌肽２５００万ＩＵ，乙种多黏菌素６００万ＩＵ而为８％，其可以消除由大分子抗体所引起的非特异性反应。成。培养基加入这些成分后，立即倾注平皿使用。可用国产实验方法为滴１滴被检血清与卡

7、片上，加入等量的抗原，轻硫酸抗生素，代替乙种多黏菌素的效果也很好，用量与乙种轻转动卡片，４ｍｉｎ内出现反应的判为阳性反应。此法效率多黏菌素相同。这种培养基抑制杂菌的能力相当强，但不影极高，凡检菌的阳性牛，一般都出现阳性反应。响布氏杆菌的生长。加热抑制试验。提高反应温度也可以抑制大分子抗体牛奶中的布氏杆菌多随奶脂上浮，故奶皮作分离培养，的凝集作用，试验时，血清按常规试管凝集法稀释，先在６２～成功的机会较多。检验阴道分泌物时，可用无菌棉球吸取分６４℃水域中灭活３０ｍｉｎ，然后按常规加入抗原，放在常温箱泌物，直接涂在选择性培养基平皿上。所有

8、接种好的培养基中培养和观察结果。均置于含１０％的二氧化碳的空气中培养。利凡诺尔实验。血清中加入利凡诺溶液，除小分子抗体１．２．２接种豚鼠外，所有血清蛋白都沉淀离心后，上清液中只剩下小分子抗接种豚鼠分离布氏杆菌的成功机会比