促红细胞生成素抑制血管重构的影响及机制的研究

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1、分类号：密级：UDC：学号：416522612678南昌大学专业学位硕士研究生学位论文促红细胞生成素抑制血管重构的影响及机制的研究Theinfluenceanditsmechanismoferythropoietinonvascularremodeling田泽洪培养单位(院、系)：南昌大学第一附属医院指导教师姓名、职称：王梦洪教授主任医师专业学位种类：临床医学专业领域名称：内科学(心血管病)论文答辩日期：2015年6月答辩委员会主席：评阅人：2015年5月学位论文独创性声明学位论文独创性声明本人声明所呈

2、交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本

3、人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_mail备注：□公开□保密（

4、向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的：研究促红细胞生成素（EPO）对血管新生内膜及其胶原分泌的影响，探讨转化生长因子ß1（TGF-ß1）在其中的作用，并阐述TGF-ß1/MMP-2（基质金属蛋白酶-2）信号传导参与的作用机制。通过大鼠颈动脉球囊损伤动物模型，观察EPO抑制血管内皮损伤后血管重构的影响，进一步阐述再狭窄相关发病机制，为临床应用提供新思路。方法：1、实验动物分组及造模将清洁级健康SD大鼠75只（雌雄不限），按照随机分配原则将大鼠分为五组，对照组，损伤组（球囊损伤颈动脉组

5、），EPO组（损伤组基础上行EPO(3000U/kg)腹腔注射干预），TGF-ß1组（EPO组基础上颈动脉外膜普朗尼克凝胶固定TGF-ß1(0.5mg/ml)干预），MMP-2组（EPO组基础上颈动脉外膜普朗尼克凝胶固定MMP-2(0.5mg/ml)干预）。采用PTCA球囊损伤大鼠单侧颈动脉的方法制造模型。每组大鼠按不同的时相点分别于术后第1、7、14天麻醉后处死。术前心尖内取血，并将术侧大鼠颈动脉切取2cm，所有血管组织标本取出后，用于相关指标的检测。2、实验指标检测大鼠血管组织行常规切片和HE染色，

6、观察组织病理学变化。行ELISA法检测大鼠血清中VEGF和TNF-α水平，选用Masson染色方法对胶原纤维进行染色。应用免疫组化染色检测血管组织中的TGF-ß1、MMP-2的表达。采用Real-timePCR法检测eNOSmRNA水平。采用Westernblot法检测P-Akt和T-Akt蛋白的表达。3、病理结果分析采用数字图像分析系统对血管标本形态学进行统计学计数分析。应用胶原纤维表达面积与其血管层面积的百分比作为胶原密度。经免疫组化评分方法作为TGF-ß1、MMP-2的表达结果，应用目的基因的相对

7、表达量作为eNOSmRNA的水平。用凝胶成像系统成像分析，以光密度相对灰度值作为P-Akt和T-Akt蛋白的表达结果。结果：1、血管组织新生内膜厚度及面积比结果：II摘要①对照组之间各时间点无显著差异（P>0.05）；②损伤组对比对照组，内膜损伤程度增加，新生内膜及面积比增加，并随时间增加而加剧，各时间点差异有显著性（P<0.05）；③EPO组对比损伤组新生内膜厚度明显减轻，面积比明显减小；但7d与14dEPO组之间无明显差异（P>0.05）；③TGF-ß1组、MMP-2组对比EPO组新生内膜厚度及面积

8、比增加，与EPO组比较有明显差异（P<0.05）；2、血清VEGF和TNF-α表达结果：①对照组各时间点无明显差异（P>0.05）；②1d损伤组VEGF及TNF-α表达即刻升高，至7d后仍维持在较高水平，至14d明显增高；EPO组各时间点水平较对照组升高，但与损伤组比较明显降低，有明显差异（P<0.05）；③TGF-ß1组、MMP-2组在损伤即刻与损伤组无明显差别，至7d、14d后，两组VEGF及TNF-α较EPO组表达升高，差异具有显著性