pim1通过调节核糖体生物合成影响前列腺癌发生发展的研究

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1、分类号：R737.25学校代码：10062密级：学号：2012602359硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：Pim1通过调节核糖体生物合成影响前列腺癌发生发展的研究TITLEStudyonthePim1affectribosomebiogenesisintheprostatecancer一级学科：临床医学二级学科：外科学泌尿外论文作者：李慧指导教师：徐勇教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R737.25学校代码：10062密级：学号：2012602359学位类别：科学学位专业学位学

2、科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：Pim1通过调节核糖体生物合成影响前列腺癌发生发展的研究TITLEStudyonthePim1affectribosomebiogenesisintheprostatecancer一级学科：临床医学二级学科：外科学泌尿外论文作者：李慧指导教师：徐勇教授导师组成员：张志宏乔宝民刘冉录张昌文天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢

3、的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论

4、文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的明确Pim1对前列腺癌细胞的核糖体生物合成的影响，并初步揭示其作用机制方法通过构建Pim1shRNA，并用其转化感受态细胞，经扩增后提取高浓度质粒，随后用Pim1shRNA转染PC3细胞，通过含有嘌呤霉素的培养基筛选后，行单克隆细胞培养，即得到稳定的转染株；分别应用实时定量qPCR及蛋白质免疫印迹技术检测转染后细胞中Pim1的mRNA表达量以及蛋白水平；运用蔗糖梯度离心技术分离前列腺癌PC3细胞系的核糖体，并提取各层离心产物的蛋白质成分，利用

5、Westernblot检测Pim1的分布规律，了解其与核糖体各亚基是否存在相互作用关系；使用蔗糖梯度离心技术分别分离PC3、Pim1低表达PC3细胞系及Pim1低表达阴性对照PC3细胞系的核糖体，利用UV检测器检测核糖体各亚基的含量在3种细胞系中的差异；进一步运用RT-qPCR检测在受影响亚基中具体受影响的核糖体蛋白。所有需要统计分析的实验数据全部使用统计软件SPSS18.0进行分析。结果1.Pim1shRNA转化的感受态细胞在扩增后提取获得了高浓度的Pim1shRNA；通过Lipofectamine2000介导将Pim1

6、shRNA成功转染入PC3细胞，通过嘌呤霉素培养筛选及单克隆细胞培养，RT-qPCR及westernblot检测单克隆细胞株中Pim1稳定低表达；2.蔗糖梯度离心及Westernblot检测发现Pim1的分布与核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体的分布密切相关，而与核糖体60S大亚基的分布无关，其差别具有统计学意义；3.蔗糖梯度离心及UV检测器检测发现Pim1低表达时，核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体的表达降低；RT-qPCR检测发现，Pim1低表达时，核糖体40S小亚基的RPS6、RPS21的表达水平

7、降低。Ⅰ天津医科大学硕士学位论文结论1．Pim1的分布与核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体的分布密切相关，而与核糖体60S大亚基的分布无关，其差别具有统计学意义，表明Pim1可与核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体相互作用；2.Pim1低表达时，核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核糖体的表达降低；RT-qPCR检测发现，Pim1低表达时，核糖体40S小亚基的RPS6、RPS21的表达水平降低。表明Pim1可以通过影响核糖体小亚基中RPS6、RPS21的表达，影响核糖体40S小亚基、80S核糖体及多聚核

8、糖体的生物合成，影响了前列腺癌的发生发展。关键词：前列腺癌Pim1核糖体生物合成II天津医科大学硕士学位论文AbstractObjective:ToidentifytheroleofPim1inimpactingribosomebiogenesisinprostatecancerandprimaryto