饲料中玉米赤霉烯酮的高效富集及免疫层析定量检测方法的建立

《饲料中玉米赤霉烯酮的高效富集及免疫层析定量检测方法的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：密级：UDC：学号：415626513096南昌大学硕士研究生学位论文饲料中玉米赤霉烯酮的高效富集及免疫层析定量检测方法的建立DevelopmentofEfficientEnrichmentandImmunochromatographicAssaysforQuantitativeDectionofZearalenoneinFeedstuffs刘坤培养单位（院、系）：食品学院食品科学与技术国家重点实验室指导教师姓名、职称：赖卫华博士、教授陈媛工程师专业学位种类：农业推广硕士专业领域名称：食品

2、加工与安全论文答辩円期：2015年5月2511答辩委员会主席:评阅人：__ilf____________2015年5月一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研宂]:作及取得的研宄成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研宂成果，也不包含为获得南昌大学或其他教眘机构的学位或证书而使用过的材料■=与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写签字日期：年‘月斗n本学位论

3、文作者完全了解南吕大学冇关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电+版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者

4、签名（手写)导师签名（手写）：1签字日期：日论文题g^论义g别丁^士二硕~院/系/所专业^公幵□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，______年月后公开)摘要摘要玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）是由镰刀菌所产生的具有类雌激素作用的次级代谢产物。ZEN对食品和饲料的污染范围较为广泛，动物和人体摄入后，对机体具有一定的毒害作用，对畜牧养殖业和人体健康会造成很大的损害。因此，加强对食品及饲料中ZEN的监控检测显得尤为重要。由于饲料样本存在一定的基质干扰，对定量检测的结果会造成一定的影响

5、，本文采用了聚乙烯亚胺-戊二醛介导体系制备了ZEN免疫磁性微球，建立了高效富集捕获饲料样本中ZEN的方法，以降低样本的基质效应对检测结果的影响。再以胶体金作为标记材料，研制出了胶体金免疫层析试纸条，结合HG-8胶体金试纸条读取仪，实现了对饲料中ZEN残留的快速定量检测。通过DCC/NHS活泼酯法制备了ZEN-BSA人工全抗原，并通过TLC监控和紫外全波段扫描验证ZEN-BSA成功合成，ZEN-BSA的浓度为2.55mg/mL；用辛酸-硫酸铵法纯化了抗ZEN单抗，对抗体的性能进行了评价，测得效价为1

6、:160000，浓度为5.36mg/mL，通过SDS-PAGE电泳对纯化后的单抗进行了纯度分析，结果表明该单抗具有较高的纯度。为了保证捕获效率，本文以聚乙烯亚胺-戊二醛介导的方法制备了免疫磁性微球，对抗ZEN单克隆抗体的偶联量进行了优化，最佳偶联条件为：1mg磁球表面偶联抗体100µg；对免疫磁富集捕获缓冲液的pH、甲醇浓度、捕获时间、微球加入量、洗脱液种类等条件进行了优化，最佳条件如下：将200µgPEI免疫磁球加入1mL20%甲醇PBS捕获缓冲液（pH7.0）中，在剧烈振荡条件下提取10min

7、，磁分离后用100µL3%氨化甲醇洗脱磁球上的ZEN，洗脱液稀释复溶后用ELISA试剂盒检测。通过样本加标回收试验的结果表明，当ZEN加标量为50-250µg/kg时回收率逐渐上升，且在250µg/kg时，回收率达到最高，为93.28%。本文以胶体金作为标记物，优化了胶体金的粒径、抗体标记的pH值、抗体的标记量、T线全抗原的包被浓度、C线二抗的包被浓度和金标抗体的喷量等几个参数，确定了定量检测ZEN胶体金免疫层析试纸条的最佳生产工艺条件：胶体金粒径为40nm，标记pH为6.0，抗体标记量为4μg/

8、mL，结合垫上的金标抗体喷量为2μL/cm，NC膜上T线ZEN-BSA的包被浓度为0.8mg/mL，C线上驴I摘要抗鼠二抗的包被浓度为0.4mg/mL。由此，成功地研制出ZEN胶体金免疫层析定量检测试纸条，定量检测时间为15min，该试纸条具有良好的特异性和稳定性，最低灵敏度为2.559µg/L，IC50=9.09µg/L。加标回收率在67.70%—104.48%之间。此外，采用ELISA试剂盒评估了本法的准确性，两种方法的相关性较好。关键词：胶体金免疫层析试纸条；玉米赤霉烯酮；定