sm-164联合多柔比星（adm）对人骨肉瘤u-2细胞增殖及凋亡的影响

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1、分类号：密级：UDC：学号：416523212154南昌大学专业学位研究生学位论文SM-164联合多柔比星（ADM）对人骨肉瘤U-2细胞增殖及凋亡的影响EffectsofSM-164combinedwithDoxorubicin（ADM）onproliferationandapoptosisinHumanosteosarcomaU-2cellline范丛亮培养单位（院、系）：南昌大学第一附属医院指导教师姓名、职称：雷刚刚副教授、副主任医师指导教师姓名、职称：杨东副教授、副主任医师专业学位种类：临床医学专业领域名称：外科学（骨外科）论文答辩日期：2015年5月答辩委员会主席：评阅人

2、：2015年5月学位论文独创性声明学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学

3、可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□√院/系/所专业E_mail备注：□√公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要背景及目的：[16]Smac作为一

4、种新型线粒体蛋白质，自从2000年7月由Du等首次报道以来作为一种新型抗癌药物得以被广泛研究，SM-164作为Smac蛋白的一种亚型，其抗癌效果更为显著，同时，有多篇报导显示，在体内外试验中，SM-164对人类多种类型肿瘤细胞有明确的抗肿瘤活性，包括前列腺癌，结肠[21,25]癌，乳腺癌，卵巢癌以及恶性黑色素瘤等。本文旨在探究SM-164单药以及联合盐酸盐多柔比星（ADM）对骨肉瘤U-2-OS的增值抑制和凋亡的作用，为进一步探讨其作用机制和可能的信号转导途径，以及SM-164作为一种新型化疗生物制剂用于人骨肉瘤（OS）治疗的可能性。方法：（1）MTT法检测SM-164单药及联合盐

5、酸多柔比星（ADM）对U-2-OS细胞的增殖抑制作用。1)检测不同浓度梯度的SM-164分别单独处理U-2-OS细胞24小时后，U-2-OS的增殖抑制作用，并绘制生长曲线；2)根据前期浓度梯度实验，SM-164作用浓度分别设定为100nM、200nM，而ADM的作用浓度则分别设定为临床用药浓度0.5μg/mL和临床半量浓度0.25μg/mL，分九组：单药SM164-100nM组、SM164-200nM组、单药ADM0.25μg/mL组、ADM0.5μg/mL组、联合用药（SM164-100nM+ADM0.25μg/mL）组、联合用药（SM164-100nM+ADM0.5μg/mL

6、）组、联合用药（SM164-200nM+ADM0.25μg/mL）组以及联合用药（SM164-200nM+ADM0.25μg/mL）组和对照组。（2）Hoechst染色检测U-2细胞凋亡。分别设置对照组、实验组1（ADM0.25/0.5μg/ml）、实验组2（ADM0.25/0.5μg/ml+SM164-100nM）。（3）流式细胞仪检测ADM（0.25μg/mL、0.5μg/mL）联合SM-164（100nM）诱导U-2细胞凋亡。结果：（1）MTT实验显示：1）当不同浓度梯度（1nM、10nM、50nmol/L、100nM、200nM、500nM、1μmol/L）的SM-164

7、分别单独处理U-2-OS细胞24小时后，U-2-OS的增殖受到抑制，并随着SM-164剂量的增加抑制程度逐II摘要渐增强，但抑制效果并不显著，对U-2细胞存活率没有显著的改变（详见表1，图1）；2）SM-164（100nM/200nM）联合ADM（0.25/0.5μg/mL）比单独使用相同浓度的ADM对U-2-OS抑制率均明显加强，两者均表现明显协同效应（详见表2，图2）。（2）Hoechst染色显示：对照组（不加药），其视野内U-2细胞与加药组相比数量虽然较多，但只有很微弱的蓝