tlr4基因在cd38--小鼠b细胞发育障碍中的作用

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1、分类号：密级：UDC：学号：406522412579南昌大学硕士研究生学位论文-/-TLR4基因在CD38小鼠B细胞发育障碍中的作用TheeffectsofTLR4geneintheobstacledBcelldevelopmentin-/-CD38mice李玲培养单位（院、系）：南昌大学医学院药学院指导教师姓名、职称：李蓉教授申请学位的学科门类：医学学科专业名称：药物分析论文答辩日期：2015年5月答辩委员会主席：张毓评阅人：王伟忠彭涛2015年5月TheeffectsofTLR4geneintheobstacledBcelldevelopme

2、ntin-/-CD38miceADissertationPresentedByLingLiMajor:PharmaceuticalanalysisSupervisor:ProfessorRongLiSubmittedtotheGraduateSchoolofNanchangUniversityfortheDegreeofMASTEROFMEDICINEMay,2015SchoolofMedicine,NanchangUniversity,Nanchang,330031,P.R.China学位论文独创性声明一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位

3、论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：李玲签字日期：2015年6月2日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全

4、部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：李玲导师签名（手写）：李蓉签字日期：2015年6月2日签字日期：2015年6月2日论文题目TLR4在CD38-/-小鼠B细胞发育障碍中的作用姓名李玲学号406522412579论文级别博士□硕士√院/系/所药

5、学院专业药物分析E_mail备注：√公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）日I摘要摘要目的：TLR4是重要的固有免疫分子，可通过识别病原相关分子模式，在机体炎性反应中扮演重要角色，同时，TLR4还参与肿瘤、动脉粥样硬化和自身免疫性疾病等的发生发展。研究表明，敲除小鼠CD38基因可引起B细胞发育障碍，主要表现为未成熟B细胞阶段的T1细胞减少及T2细胞发育阻滞。我们的前期研究发现在小鼠骨髓中，TLR4只表达于成熟B细胞，且随B细胞迁移至脾脏而显mut-/-著升高；TLR4小鼠骨髓B细胞发育障碍；此外，CD38小鼠脾脏组织中TLR4的

6、表达显著下降。这些结果提示CD38和TLR4对B细胞发育的影响可能存有内在联系。本研究旨在进一步探讨CD38和TLR4在B细胞发育中的作用及其机制，并试图阐明CD38和TLR4在促进B细胞发育过程中的相互作用及可能的信号通路，从而为深入研究B细胞发育提供新的线索和依据。方法：-/-1.WT和CD38雌鼠腹腔注射LPS，两周后分离其脾脏B细胞，流式细胞仪检测B细胞的发育、周期和凋亡；-/--/-mut2.制备CD38和CD38TLR4小鼠；3.提取小鼠尾巴的DNA，通过聚合酶链式反应（polymerasechainreaction,PCR）-/--

7、/-mut鉴定小鼠是否成功敲除CD38基因；分别提取CD38和CD38TLR4小鼠耳朵的RNA，通过RT-PCR技术检测其TLR4的mRNA表达水平；-/--/-mut4.通过磁珠分选技术从CD38和CD38TLR4小鼠脾脏中进一步分选并纯-/--/-mut化出B细胞，通过RealtimePCR检测CD38和CD38TLR4小鼠脾脏B细胞中TLR4的mRNA表达水平，同时检测炎性因子(包括TNF-α、MCP-1和IL-1β)的表达水平；-/--/-mut5.分别提取CD38和CD38TLR4小鼠脾脏B细胞蛋白，通过WesternBlot-/--/

8、-mut技术检测CD38和CD38TLR4小鼠脾脏B细胞中TLR4的蛋白表达水平，同时通过免疫印迹技术检测Sirt1、NF-κB（p65