葡萄球菌肠毒素致炎作用与猪免疫相关分子关系的研究

《葡萄球菌肠毒素致炎作用与猪免疫相关分子关系的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、鑽Ａ營东ＴＩＡＮＪＩＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ中国第－所现代大学ｌＨＦＯＵＮＤＥＤＩＮ１８９５Ａ１ｉ禱垂ｍＪＩ：ｉｉ膽ｌＬＩ：遞＾：硕±学位论文，■ｍｉｉｉｍｈｉｉｉ—■＜口食口口科学学科专业；Ｉ者姓名：贺仙ｇ，作＾＇金海副教授指导教师：黄三｜ｍ胃：天津大学研究生院每：２０１５＾５＾Ｉ；．拖麵：、，：独创性声明本人声明所呈交的学位论丈是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研巧成果，除了文中特别加Ｗ标注和致谢么处外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的

2、研巧成果，也不包含为获得夭津大学或其他教育机构的学化或证书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论丈中作了明确的说明并表示了谢意。＞§日学枯论文作者签名：签字日期；巧／ｆ年乃学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津大学有关巧留。、使用学位论文的规定特授权天津大学可将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检＾，ｉ。索并采用影印、缩印或扫描等錠制手段保巧、汇编ｉ？供巧阅和借隔同窟学校向国家有关部口或机构送巧论文的复印件和磁盘。（保密的学位论文巧解密后适用本授权说明）一ｋｔ：学位论文作者签名：嘴免

3、导师签名＂／：Ｈ期：ｒ年签字日期日签字沁曰年月／月ｉ之方Ｓ葡萄球菌肠毒素致炎作用与猪免疫相关分子关系的研究TheRelationshipsofPorcineImmune-relatedMolecules&InflammatoryReactionInducedbyStaphylococcalEnterotoxins学科专业：食品科学研究生：贺仙芝指导教师：黄金海副教授天津大学化工学院二零一五年五月摘要葡萄球菌肠毒素（Staphyloccucalenterotoxins，SEs）是由葡萄球菌产生的一类耐热性好、稳定度高的可溶性胞外毒蛋白，可引发人类多种免疫疾病。葡萄球菌

4、肠毒素通过潜在的胃肠毒素及超抗原两种机制发挥其毒性作用，诱导炎性反应，但其致炎机制的分子细节尚不清楚。论文克隆表达了几种免疫相关表面分子，并分析了其分子特性及结构，研究了几种重组新型肠毒素对免疫细胞表达相关免疫分子的影响，评价了这些分子表达变化与葡萄球菌肠毒素致炎症的关系。分别以猪T、B、PBMC、PAM细胞总RNA为模板，RT-PCR扩增6种猪免疫相关表面分子CD28、CD25（T细胞），CD86(B细胞)，IL17A(PBMC)，MHCI、MHCII(PAM细胞)，克隆至克隆载体pUCTsimple获得6种猪免疫相关基因。测序结果显示，6种分子与GenBank/NCBI

5、已登陆序列同源性高于95%。编码蛋白序列一级结构预测表明，除IL17A为胞外蛋白外，其余5种分子均存在跨膜域；CD28、CD86、MHCI、MHCII均含一个Ig结构域，CD25包含两个重复的补体控制蛋白结构域。对6种分子糖基化位点、抗原表位以及磷酸化位点预测，应用于后期6种分子信号通路的研究。通过生物信息学分析软件对6种猪免疫相关表面分子蛋白特性进行分析，分别以6种克隆的分子质粒为模板，构建了缺失信号肽或跨膜域的重组表达质粒pET28a-CD28、pET28a-CD86、pET28a-CD25、pET28a-IL17A、pET28a-MHCI、pET28a-MHCII。构

6、建的pET28a-X系列重组菌经诱导表达、包涵体蛋白纯化，获得高纯度的重组蛋白CD28、CD86、CD25、IL17A、MHCI、MHCII。对6种重组蛋白亚细胞分布和三级结构进行预测，同源模建了几种葡萄球菌肠毒素与猪MHCII分子互作的分子细节，分析其对不同肠毒素超抗原活性的影响。设计了猪肠道上皮细胞上的趋化因子及其相应受体CXCL2、CXCL8-CXCR2；MCP-1-CCR2；CCL25-CCR9、CCL28-CCR10、CXCL10-CXCR3，以及6种猪免疫相关表面分子的特异性检测引物，运用相对荧光定量PCR的方法，检测了SEs体内外刺激后各类分子转录水平变化。S

7、Es体外刺激猪IEC、PBMC、PAM细胞后，趋化因子及其受体均在48h或72h时表达量上调，表明SEs刺激可引发细胞表面趋化因子分泌，募集表达其相应受体的免疫细胞，引发炎性反应；而体内刺激变化趋势不定，特别是SEs体内刺激后，PBMCs和PAM细胞表面相应趋化因子及其受体表达受抑制；SEO体内刺激后，CD28、CD25、IL17A、MHCII转录水平显著提高，其他肠毒素作用不明显，可能与机体内免疫系统多元、多向、时空调控的复杂性有关。关键词：葡萄球菌肠毒素；免疫相关表面分子；重组蛋白；肠道上皮细胞；趋化因子及其受