金黄色葡萄球菌肠毒素（se）酶联免疫分析（elisa）

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1、金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。1使用目的：本试剂盒用于检测牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)含量。2实验原理本试剂盒采用直接竞争ELISA方法，在微孔板包被有金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)偶联抗原，加入金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)标准品或样品，游离金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)与微孔条上预包被的金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)偶联抗原互相竞争抗金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)含量成反比，通过标准曲线

2、计算样品中金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)的含量。3试剂盒组成3.1预包被的SE偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。3.2SE标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0pg/ml，0.1pg/ml,0.3pg/ml,0.9pg/ml,2.7pg/ml,8.1pg/ml。3.3抗SE抗体酶结合物：1瓶（6ml）。3.4显色液A：1瓶（6ml）。3.5显色液B：1瓶（6ml）。3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。3.7样本稀释液：1瓶（10×,6ml），用于样品稀释用。3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。3.9说明书一份。44需要而未提供的材料4.1设备4.1.1波

3、长450nm酶标仪。4.1.2粉碎机。4.1.3量筒。4.1.4振荡器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相当的滤纸。4.1.7微量移液器。4.2试剂4.2.1去离子水或蒸馏水。4.2.2甲醇。5贮存5.1试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻5.2未用完的微孔板应该密封干燥保存6注意事项6.1使用试剂盒前请仔细阅读说明书。6.24不要使用过期试剂盒。6.3试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。6.4标准品中含有金黄色葡萄球菌肠毒素，使用时应特别注意，操作时应带手套。6.5终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。6.6不同标准品、样品所用吸头不能

4、混用，否则会影响试验结果。6.7不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响实验结果。6.8稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液，否则会影响实验结果6.9混合试剂时应避免起泡。7工作液准备7.1SE标准品溶液：0pg/ml，0.1pg/ml,0.3pg/ml,0.9pg/ml,2.7pg/ml,8.1pg/ml7.2浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用7.3样本稀释液：用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用7.3显色剂：已备用，避免光线直照7.4反应终止液：已备用8样品处理程序（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则

5、会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）8.1取10g粉碎的样品，加20ml70%甲醇溶液8.2强力振荡3分钟8.3用WhatmanNo1滤纸过滤8.4取100µl处理后的样品，加入400µl样本稀释液8.5取50μl稀释液进行分析（稀释倍数10）9酶免分析步骤9.1实验须知9.1.1实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保证回温充分，否则影响检测的精确度和准确度。9.1.2使用后请立即将试剂放回2~8℃保存9.1.3请不要改变分析程序9.1.4请使

6、用精确的微量移液器9.1.5操作一旦开始，请不要中断任何程序9.1.6ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作9.1.7为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样9.1.8加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面9.2分析步骤9.2.1预先进行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测9.2.2取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（10×）稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)9.2.4在B0孔中加入50µl0.0pg/ml标准品溶液9.2.5在各标准孔中加入50

7、μl的标准品溶液9.2.6在各样品孔中加入50µl样品溶液9.2.7在所有孔中加入50µl的抗金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)抗体酶结合物9.2.8轻轻晃动反应板几秒钟。9.337℃温浴30min（温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）9.3.14甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。9.4反应9.4.1洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A，再加50µl显色液