海普诺(hpn)改善hepg2细胞胰岛素抵抗作用的研究

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1、分类号：R965R963密级：不保密UDC：610学校代码：11065硕士学位论文海普诺（HPN）改善HepG2细胞胰岛素抵抗作用的研究金水华指导教师梁惠教授学科专业名称营养与食品卫生学论文答辩日期2015年6月1日摘要目的本课题通过高糖高胰岛素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型，探究海普诺(HPN)对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响，和对胰岛素抵抗HepG2细胞内蛋白水平及磷酸化水平改善作用，并初步探讨可能的分子生物学机制，为HPN的进一步的开发利用提供实验依据。方法1.用CellCountingKit-8（CCK-8）法研究不同浓度的HPN

2、对肝癌细胞株(HepG2)-7-4细胞活性的影响。体外培养HepG2细胞，CCK-8法检测浓度为（1×10～1×10mol/L）的HPN作用HepG2细胞后24h，36h和48h的存活率。以及在倒置显微镜下观看各个浓度的HPN作用HepG2细胞48h细胞形态的变化。2.胰岛素抵抗HepG2细胞模型的建立。实验设立对照组和模型组，将含有胰岛素培养液中培养的HepG2细胞作为模型组，不含胰岛素的培养液中培养的HepG2细-7胞为正常对照组。以浓度为30mmol/LD-葡萄糖和不同浓度的胰岛素（1×10～-65×10mol/L）的培养基培养HepG2细胞72h，

3、后换正常的培养基持续6h后检测细胞上清液中葡萄糖消耗量，以确定高糖高胰岛素诱发的HepG2细胞胰岛素抵抗造模最佳胰岛素浓度。3.胰岛素抵抗模型建立以后，用不同浓度的HPN作用胰岛素抵抗HepG2细胞6h，用多功能自动生化仪葡萄糖-己糖激酶法检测不同浓度的HPN对HepG2细胞上清液中的葡萄糖消耗量的影响。4.蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测HPN处理的胰岛素抵抗HepG2细胞6h后细胞内PTP-1B，IRS-1，Akt蛋白的蛋白水平以及IRS-1(Tyr612)酪氨酸磷酸化，Akt（Ser473）丝氨酸磷酸化水平。结果1.CCK-8结果显示在低

4、浓度时HPN促进HepG2细胞增殖的作用，细胞活性与HPN浓度的呈负相关，并对时间的依赖性不明显；倒置显微镜下观看细胞形态及-4数量有明显改变，尤其在HPN浓度为1×10mol/L时。2.高糖和高糖高胰岛素均能诱导HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立，诱发HepG2-6细胞胰岛素抵抗造模最佳胰岛素浓度为1×10mol/L，D-葡萄糖浓度为30mmol/L。-8-73.在胰岛素抵抗HepG2细胞中，在HPN浓度为5×10～1×10mol/L时都能促进-7胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗（P<0.05），尤其当HPN浓度为1×10mol/L时，能显著促进胰岛素

5、抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗（P<0.01）。4.经WesternBlot结果检测显示，经HPN处理的胰岛素抵抗HepG2细胞中较模型组PTP-1B蛋白表达水平有明显的下降，IRS-1蛋白表达水平有明显升高，而IRS-1(Tyr612)的酪氨酸磷酸化；虽其下游PI3K/Akt信号通路中Akt蛋白没有明显变化，但能引起Akt（Ser473）的丝氨酸的磷酸化水平有明显升高，故HPN促进胰岛素信号通路下传，增强胰岛素刺激的葡萄糖摄取。结论HPN能明显促进胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖摄取和增强胰岛素信号下传，可能通过抑制细胞内PTP-1B蛋白水平的表达，增强胰

6、岛素信号中IRS-1蛋白表达，提高IRS-1(Tyr612)酪氨酸磷酸化，和影响其下游PI3K/Akt信号通路中Akt(Ser473)丝氨酸磷酸化水平，提高对胰岛素敏感性，从而达到改善胰岛素抵抗的目的。硕士研究生金水华（营养与食品卫生学）指导教师梁惠教授史大永研究员关键词：海普诺；胰岛素抵抗；HepG2细胞；高糖高胰岛素AbstractObjectiveThestudyestablishedmodelofinsulinresistanceinducedbyhighglucoseandinsulininHepG2cells,toinvestigatethee

7、ffectsofHPNonglucoseconsumptionininsulinresistanceHepG2cells,andHPNcanimproveinsulinresistanceintracellularproteinlevelsandphosphorylationlevels,andpreliminarytoinvestigatethepossiblemolecularmechanisms,andprovideexperimentaleviden-cesforthefurtherdevelopmentoftheuseofHPN.Method1.

8、TheeffectofHPNonviabilityofHepG2c