树豆酮酸a改善胰岛素抵抗的作用研究

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1、广州中医药大学学位论文原创性声明’、本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名盈整日期：加f审年多月勰日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内

2、容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名独堡论文导师签名日期：砷心年王月摘要实验目的采用地塞米松诱导的肝胰岛素抵抗细胞模型、脂肪细胞胰岛素抵抗模型和肌细胞胰岛素抵抗模型，研究树豆酮酸A(缩写CAA)调节糖脂代谢、改善胰岛素抵抗的作用，并探讨其可能的作用机制。实验方法采用CCK8法检测不同浓度的CAA对3T3一L1小鼠前脂肪细胞增殖的影响；诱导3T3一L1小鼠前脂肪细胞分化，油红0染色法检测不同浓度的CAA对细胞成脂分化的影响；实时荧光定量PCR和Western—blot法在mRNA和蛋

3、白质水平追踪细胞分化过程中蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTPlB)的表达情况。3T3-L1小鼠前脂肪细胞、C2C12小鼠成肌细胞分别诱导分化为成熟的脂肪细胞和肌细胞，采用地塞米松(DEX)诱导人肝细胞HepG2以及分化成熟的3T3一L1、C2C12细胞建立胰岛素抵抗细胞模型，不同浓度CAA作用于各细胞模型，葡萄糖氧化酶一过氧化物酶法(GOD—POD法)检测细胞葡萄糖消耗量；实时荧光定量PCR和Western—b]ot法检测PTPlB基因及蛋白表达水平；Western-blot法检测胰岛素信号传导通路中相关蛋白(IRS一1、IRS一2、IR13、PI。K、AKT、GLUTl、

4、GLUT4、GSK一3B)表达及磷酸化(p-IR13、p-AKT)水平。实验结果1．PTPlB在3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中的表达：实时荧光定量PCR结果显示，3T3一L1前脂肪细胞于细胞融合1天后，PTPlBmRNA水平逐渐增加，分化诱导剂I加入2天出现峰值：随后PTPlBmRNA水平呈下降趋势，诱导分化液换成正常培养基后，随着细胞呈现明显的成脂样分化(胞质出现脂滴)，PTPlBmRNA水平再次上升。Western～blot结果显示，PTPlB蛋白水平变化趋势同mRNA，但出现滞后。2．CAA对3T3一L1前脂肪细胞增殖及分化的影响：CAA在18．75—20

5、0umol／L浓度范围内对3T3一L1前脂肪细胞增殖无显著影响(P>O．05)，但抑制其向脂肪细胞的分化以及脂肪的合成，且随剂量增加而增强。在150和200umol／L浓度抑制作用显著(PO．05)，但明显促进地塞米松诱导的胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗(P

6、12mol／L)可显著降低胰岛素抵抗脂肪细胞PTPlBmRNA及蛋白表达水平(P

7、胞IRS-1、IRS一2、IRt3、P—IR13及PI。K的表达(PO．05)，其中，IRl3增加了26．99％，P一工R13增加了67．19％，IRS-1增加了60．03％，IRS-2增加了180．67％，PI。K增加了40．74％。4．CAA对胰岛素抵抗肝细胞的作用：CAA(401．tmo]／L)对正常细胞葡萄糖消耗无显著影响(Jp>0．05)，但明显促进地塞米松诱导的胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗(P