铁对caco-2细胞及肉仔鸡锰吸收的影响及其机制

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1、硕:lr学了元沦文铁对Caco-2细胞及肉仔鸡锰吸收的影响及其机制EffectofIrononManganeseAbsorptionandTheMechanismsinCaco-2CellsandBroilers一级学科：生物学二级学科：动物学研宄生：唐家明指导教师：李素芬河北瓶师范学院2015年6月分类号：6?”灶密级：UDC：单位代码：10798铁对Caco-2细胞及肉仔鸡锰吸收的影响及其机制EffectofIrononManganeseAbsorptionandTheMechanismsinCaco-2CellsandBroil

2、ers二级学科：动物学研宄方向：动物营养生理研究生：唐家明指导教师：李素芬所在院所：动物科技学院2015年6月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研宄工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得河北科技师范学院_或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名

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5、签字日期：年（月曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北科技师范学院有关保留

6、、使用学位论文的规定。特棬权河北科技师范学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。(保密的学位论文在解密后适用本授权说明）学位论文作者签名：导师签名:杳yvljf年Z月签字日期：>(y年<月〜日签字日期:摘要本论文通过两个试验分别研究了铁对Caco-2细胞及肉仔鸡锰吸收的影响及其机制｡试验一研究了铁处理对Caco-2细胞锰吸收的影响及其机制。本试验包括2个小试验。试验1研究了不同接种密度对Caco-2细胞吸收模

7、型分化及去极化评价指标的影响,确定了细胞模型适用于吸收和转运试验的时间｡将Caco-2细胞按高密度524242(1×10cells/cm)､中密度(5×10cells/cm)和低密度(3×10cells/cm)三个接种密度，分别接种于带聚碳酸酯微孔滤膜插槽的Transwell6孔板上,培养29天,通过测定跨膜电阻值(TEER)､碱性磷酸酶活性(ALP)和酚红透过率,评价细胞单层的完整性､极化和透过性｡结果表明：高､中､低密度接种分别于第12､15和218天TEER值超过600Ω/cm,第27､29和29天TEER值开始下降；高､中､低

8、密度接种分别于第15､18和21天上、下侧碱性磷酸酶活性的比值达到10倍以上,第29天开始降低；高､中､低密度接种分别于第9､12和15天酚红透过率小于0.5%｡综合上述三项指标,高密度接种细胞在第15天､中密度接种细胞在第18天､低密度接种细胞在第21天开始,可以用于吸收和转运试验,27天以后细胞活力就开始下降,不适合做吸收和转运细胞模型｡试验2研究了铁处理对Caco-2细胞锰吸收的影响及其机制｡采用单因子完全随机试验设计,共5个处理组，分别为正常含血清培养基、正常含血清培养基加铁100μmol/L、正常含血清加铁200μmol/L

9、、无血清培养基添加铁100μmol/L和无血清培养基加铁200μmol/L，每个处理6个重复｡分别在细胞培养的第18~23天在培养基里以次氮基三乙酸络合铁的形式添加铁，铁处理120h结束后，在所有细胞培养液中以无机硫酸锰的形式添加800μmol/L锰，37℃､50r/min水浴振荡器上振荡孵育120min，收集细胞及上、下层培养液，测定其中铁和锰含量；分别在铁处理72和120h后收集细胞，测定二价金属转运蛋白1（DMT1）、膜转铁蛋白1（FPN1）和十二指肠细胞色素还原酶b(Dcytb)mRNA及蛋白表达量。结果表明：与不加铁对照组相

10、比，无血清培养基中添加铁处理组细胞中铁含量显著高于对照组（P<0.09），有血清培养基中添加铁处理组细胞中铁含量无显著提高（P>0.31）；无血清培养基中添加铁处理组和有血清培养基中I添加铁200μmol/L处理组细胞对锰的摄取量（P<0.03）和吸收量（P<0.02）均显著降低；铁处理72h有血清培养基中添加铁对DMT1mRNA（P>0.38）和FPN1（P>0.43）mRNA无显著影响，铁处理120h有血清培养基中添加铁200μmol/L和无血清培养基中添加铁组DMT1(P<0.01)和DcytbmRNA(P<0.05)水平均显著

11、降低，无血清培养基中添加铁处理72和120h均显著降低DMT1（P<0.01）和FPN1（P<0.05）mRNA水平，对DcytbmRNA水平无显著影响（P>0.14）；铁处理72和120h对FPN1蛋白表达量均无显著影