锰缺乏对肉仔鸡胫骨生长板软骨细胞发育相关因子的影响

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1、山东农业大学硕士学位论文锰缺乏对肉仔鸡胫骨生长板软骨细胞发育相关因子的影响姓名：王健申请学位级别：硕士专业：临床兽医学指导教师：王振勇20120615山东农业大学硕士学位论文中文摘要为研究锰缺乏对肉仔鸡胫骨生长板发育的影响，探讨锰缺乏导致胫骨发育障碍的信号机制，本研究主要从软骨细胞增殖、软骨细胞凋亡和软骨细胞外基质降解三个方面着手，探讨了锰缺乏对胫骨生长板发育相关因子的影响，为系统研究锰缺乏导致肉鸡胫骨“短粗症”的发生机理提供一定的科学依据。90只1日龄ArborAeres雏鸡随机分为三组，并分别给予以下日粮：对照日粮(60m

2、gMn／kg)，锰缺乏日粮(40mgMn／kg，锰缺乏I组；8．7mgMn／kg，锰缺乏II组)。每天给予24h光照，保证充足的日粮和饮水。饲喂42天后，取胫骨生长板。用游标卡尺测量生长板厚度，用测微尺测量生长板增殖区和肥大区宽度。然后将其固定于4％福尔马林中，石蜡包埋，5um切片。石蜡切片用于HE染色和免疫组化。取大约0．29胫骨生长板迅速放入液氮中保存，用于RNA的提取。另外一些生长板样品在2．5％戊二醛固定24h，环氧树脂包埋，通过电镜对生长板软骨细胞进行超微检查。用TUNEL法检测生长板软骨细胞的凋亡情况；用免疫组化法

3、检测P21、Bcl．2、ebfal、CDMP．1、MMP．1、Cx43、PTHrP蛋白的表达；用实时荧光定量RT-PCR方法检测P21、Bel．2基因的表达。实验结果如下：(1)锰缺乏导致肉仔鸡胫骨生长板以及生长板的增殖区和肥大区厚度显著变窄(PO．05)；Cx43的表达量显著增多(P

4、。(3)锰缺乏导致肉仔鸡胫骨生长板软骨细胞线粒体外膜模糊不清，线粒体嵴发生断裂；n腿L法表明，锰缺乏组肉仔鸡胫骨生长板软骨细胞凋亡率显著增高(P<0．05)；与对照组相比，低锰组Bel．2的相对表达显著减少(P0．05)。结论：锰缺乏可导致软骨基质胶原纤维的降解，抑制胫骨生长板增殖区软骨细胞的增殖，促进肥大区软骨细胞的凋亡，而且锰缺乏引起的软骨细胞凋亡可能依赖于线粒体途径。锰缺乏引起生长板发育障碍的信号通路可能为珊：1／Pn瑚途径。关键词：锰缺乏：生长板；软骨细胞；

5、细胞增殖；细胞凋亡锰缺乏对肉仔鸡胫骨生长板软骨细胞发育相关因子的影响EffectsofmanganesedeficiencyOnchondrocytesdevelopment—relatedfactorsinbroilers’tibiagrowthplateAbstractToinvestigatetheeffectsofmanganesedeficiencyonchondrocytesdevelopmentandsearchforthesignalingmechanismoftibiadisorderdevelopmentc

6、ausedbymanganesedeficiency,chondrocytesproliferationandapoptosisandcartilageextracellularmatrixdegradationintibiagrowthplateweretested．Chondrocytesdevelopment—relatedfactorsweremeasuredandanalyzed，inordertoprovidethefoundationforpathogenesisofperosiscausedbymanganes

7、edeficiency．Ninety1-day-oldArborAcreschickswererandomlydividedintothreegroupsandfedoncontroldiet(60mgMn／kgdiet)andmanganesedeficiencydiets(40mgMn／kgdiet,manganesedeficiencygroupI；8．7mgMn／kgdiet，manganesedeficiencygroupII)，respectively,诵ma24-hlight，andweregivenfreeac

8、cesstofoodandwater．AllchickswerekilledbYcervicaldislocationincompliancewithinstitutionalguidelinesandinahumanefashionattheageof42days．Theg