盘状结构域受体1调控上皮—间质转化影响胃癌侵袭转移分子机制的研究

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1、隹＂、分类号７３５．２：；Ｒ密级公开，鴻Ｗｆ；嚷研究生学位论文胃！？一－Ａｌａ盘状结构域受体１调？上皮－间质转化影响胃；？论文题，出＾、目（中文）：癌侵袭转移分子机制的研巧－马ＳｔｕｄｏｎｔｈｅＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＩｎｖａｓｉｏｎａｎｄｙ思？方．来论文题目（外文）ＭｅｔａｓｈｓｉｓｏｆＧａｓｔｒｉｃＣａｎｃｅｒＡｆｆｅｃｔｅｄｂＤＤＲ１ｖｉａｙ－ｍａＲｅｕｌａｔｉｎ化ｅＥｉ化ｅｌｉａｌＭｅｓｅｎｃｈｌＴｒａｎｓｉｔｉｏｎ巧ｇｇｐｙ＇Ｗ研究生姓名谢瑞霞学

2、科．、专业内科学消化系病学研巧方向消化道肿瘤学位级别硕±导师姓名、职称张德奎副教授论文工作起止年月２０１３年１月至２０１５年１月论文提交日期２０１５年５月论文答辩日期２０１５年５月学位授予日期２０１５年６月＇游校址：甘肃省兰州市原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，均己明确注明出处。除文中己经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡献的个人和集

3、体，巧己在文中Ｗ明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。４＇＆？办Ｓ．论文作者签名；今扳日親；＞ｆ关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属兰州。、大学本人完全了解兰州大学有关保存使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部口或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权兰州大学可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据。库进行检索，可Ｗ采用任何复制手段保存和汇编本学位论文本人离校后发表一、使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，第署名单位仍然为兰州大学。

4、本学位论文研究内容：□可Ｗ公开□不宜公开，已在学位办公室办理保密申请，解密后适用本授权书。＂＂一（请在Ｗ上选项内选擇其中项打Ｖ）论文作者签名；奇畔导师签名：义王《Ｉ■／日期日期：：Ｉ兰州大学研究生学位论文盘状结构域受体－间质转化影响１调按上皮胃癌侵袭转搜分子机制的研巧盘状结构域受体－１调控上皮间质转化影响胃巧侵袭转移分子机制的研究中文摘要－目的观察ＤＤＲ１是否通过调控上皮间质转化影响胃癌细胞的侵袭转移，并探讨其可能的分子机制。方法（１）运用免疫组化法筛选ＤＤＲ１高表达及低表达胃癌细胞株。但）构建ＤＤＲ１靴向ｓｉＲ

5、ＮＡ，瞬时转染ｓｉＲＮＡ于ＤＤＲ１高表达胃癌细胞，ＲＴ－ＰＣ民及ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法检测ＤＤＲ１在转染前后的表法情况。应用ＭＴＴ法、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ法及流式细胞法检测转染前后胃癌细胞的増殖、迁移侵袭能力、细胞周－期及调亡的变化。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法检测转染前后ＥＭＴ相关蛋白Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ及Ｖｉｍｅｎｔｉｎ的表达变化，并检测ＥＭＴ相关信号蛋白Ｓｎａｉｌ的表达。（３）构建ＤＤＲ１重组慢病毒稳定转染ＤＤＲ１低表达胃癌细胞Ｗ过表达胃癌细－ＰＣＲｅｓｎＭＴＴ胞ＤＤＲ１，ＲＴ及ＷｔｅｒＢｌｏｔ法检测ＤＤＲ１在转染前后的表达情况。应用法、平板克隆

6、形成实验、Ｔｒａｎｓｗｅｌ酷Ｗ及流式细胞法分别检测过表达ＤＤＲ１对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和细胞周期及稠亡的影响。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法检测转染前－ｃａｄｈｅｒｉｎ及Ｖｅｎｔｎ的表达后ＥＭＴ相关蛋白Ｅｉｍｉ变化，并检测ＥＭＴ相关信号蛋白Ｓｎａｉｌ的表达。（４－拾）裸鼠背部皮下注射携带ＧＦＰ的ＤＤＲ１重组慢病毒稳转的ＢＧＣ３细胞构６建裸鼠移植瘤模型，２Ｘ１０细胞裸鼠皮下接种，分别于７ｄ、２１ｄ、３５ｔ４９ｄ行小动物活体成像Ｗ测定移植瘤大小，观察ＤＤＲｌ过表达对裸鼠体内胃癌移植瘤生长的影响，４９ｄ处死裸鼠，取瘤体观察其组织细胞形态和血管生成相关蛋白Ｃ

7、Ｄ３４的表法情况。结果ＭＫＮ－４５－－－（１）对胃癌细胞、ＢＧＣ８２３、ＳＧＣ７９０１及正常胃粘膜细胞ＧＥＳ１免疫组织化学分析结果显示：胃癌细胞ＤＤＲ１表达均为阳性，而正常胃粘膜细－－－胞ＧＥＳ１表达呈阴化ＤＤＲ１在胃癌细胞ＭＫＮ４５中表达最强而在ＢＧＣ８２３中表达最弱。－－ｔｌ－ｓＭＫＮ（２）ＲＴＰＣＲ及ＷｅｓｅｒｎＢｌｏｔ结果显示ＤＤＲｉＲＮＡ转染胃癌细胞４５＜后，ＤＤＲ１在该细胞的表达明显下降（ｐ０．０５），而ＤＤ民１重组慢病