酯酶同工酶和ssr标记在油菜种子纯度鉴定上的研究

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1、分类号：S565.4学校代码：10712UDC：6.^3研究生学号：2013050103密级：公开衣林费长大学2015届全日制硕士专业学位研究生学位论文酯酶同工酶和SSR标记在油菜种子纯度鉴定上的研究类型农业推广硕士领域、方向___________________研究生梁晓芳指导教师董振生研究员合作指导教师董军刚讲师完成时间2015年5月中国陕西杨凌研宄生学位论文的独创性声明本人声明：所呈交的全日制硕士专业学位论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究结果；论文中的研究数据及结果的获得完全符合学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术

2、道德的暂行规定》，如果违反此规定，一切后果与法律责任均由本人承担。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究结果，也不包含其他人和自己本人已获得西北农林科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文的致谢中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日导师指导研宂生学位论文的承诺本人承诺：我的全日制硕士专业学位研冗生.所呈交的硕士学位论文是在我指导下独立开展研究工作及取得的研究结果，属于我现岗职务工作的结果，并严格按照学校《关于规范西北农林科

3、技大学研究生学术道德的暂行规定》而获得的研究结果。如果违反学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，我愿接受按学校有关规定的处罚处理并承担相应导师连带责任。关于研究生学位论文使用授权的说明本学位论文的知识产权归属西北农林科技大学。本人同意西北农林科技大学保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；同意西北农林科技大学将本学位论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。本人保证，在毕业离开（或者工作调离）西北农林科技大学后，发表或者使用本学位论文及其相关

4、的工作成杲时，将以西北农林科技大学为第一署名单位，否则，愿意按《中华人民共和国著作权法》等有关规定接受处理并承担法律责任。任何收存和保管本论文各种版本的其他单位和个人(包括研究生本人)未经本论文作者的导师同意，不得有对本论文进行复制、修改、发行、出租、改编等侵犯著作权的行为，否则，按违背《中华人民共和国著作权法》等有关规定处理并追究法律责任。(保密的学位论文在保密期限内，不得以任何方式发表、借阅、复印、缩印或扫描复制手段保存、汇编论文）I研究生签名：时间：年月曰酯酶同工酶和SSR标记在油菜种子纯度鉴定上的研究摘要近年对于种子纯度鉴定的方法越来越

5、丰富，大家旨在探究一种高效、准确、易操作的鉴定方法，本文在前人的基础上综述了形态学标记、细胞标记、生化标记、分子标记（限制性扩增长度多态性、RAPD、AFLP、SSR、EST-SSR）、高光谱图成像技术等在种子纯度鉴定方面的基本原理和进展，客观公正的概述了各检测方法的优缺点。详细研究了酯酶同工酶电泳方法，且运用了酯酶同工酶电泳和SSR标记的方法对杂交油菜陕油2014及其亲本362A、830C；机械化收割陕油18及其亲本9A、1521C进行了探讨，并对品种纯度和真实性进行了验证，所得结果如下：1．酯酶同工酶研究1）不同酯酶同工酶染色剂配方的筛选，

6、因为试剂价格昂贵，且每次要现配现用所以在试剂用量合适的情况下要筛选确保酶谱染色清晰整齐的染色剂配方。2）在最佳染色剂配方确定后，在室内进行材料1521C发芽实验，从第3天开始随机取材连续取四天，以确定最佳取材天数。从图谱发现第5天酯酶同工酶的酶表达量较多，染色条带清晰且整齐。3）运用传统的酯酶同工酶电泳方法鉴定机械化收割陕油18及其亲本9A、1521C，杂交油菜陕油2014及其亲本362A、830C表明：9A和陕油18谱带相同；362A和陕油2014谱带几乎相同，父本与杂交种差异明显。因此，用酯酶同工酶不能有效区分陕油18；陕油2014种子的纯

7、度。4）采用改进的酯酶同工酶电泳方法直接取陕油2014及其亲本的干种子，陕油18及其亲本的干种子进行试验。结果表明：去掉浓缩胶，不仅节约了试剂，时间，而且其酶谱与用幼苗进行实验相比，不仅实验操作方便，易于推广，且酶谱清晰整齐，酶谱的表达量也比以幼苗为材料的多。5）以一年收的1521C与当年收1521C干种子进行验证实验，发现两者的图谱一致，没有差异。表明用干种子直接进行油菜杂交种纯度鉴定试验不仅节省时间操作简单准确而且不受时间的限制。2．SSR标记研究结果利用简单重复序列（SSR）标记方法鉴定陕油2014；陕油18的纯度，引物CB10159可在

8、各自杂种F1中扩增出父、母本的互补特异带，此引物可用于鉴别陕油2014、陕油18种子的纯度；BRAS100为一特异性较强的引物，仅在陕油2014中扩增