大鼠肝脏缺血—再灌注中线粒体dna损伤与修复机制的初步研究

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1、中图分类号：R656单位代码：10660UDC：617学号：10660S120423学科专业代码：100210密级：公开贵阳医学院2015届硕士学位论文(科学学位）大鼠肝脏缺血-再灌注中线粒体DNA损伤与修复机制的初步研究ThepreliminarystudyofmitochondrialDNAinjuryandrepaii'mechanismonthehepaticischemia-reperfusion研究生：余曦导师：张莹教授孙诚谊教授年级：2012级专业：外科学(普外）贵阳医学院学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在

2、导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。除与外单位合作项目将予以明确方式规定外，本研究已发表与未发表成果的知识产权均归属贵阳医学院。本人完全意识到本声明的法律后果由本人求担。学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权贵阳医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编

3、入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“V”）：中图分类号：R656单位代码：10660UDC：617学号：10660S120423学科专业代码：100210密级：公开贵阳医学院2015届硕士学位论文（科学学位）大鼠肝脏缺血-再灌注中线粒体DNA损伤与修复机制的初步研究ThepreliminarystudyofmitochondrialDNAinjuryandrepairmechanismonthehepaticischemia-reperfusion论文作者：余

4、曦指导教师：张莹教授申请学位：医学硕士培养单位：临床医学院学科专业：普通外科学研究方向：肝胆胰脾基础与临床研究起止日期：2013年9月至2015年2月论文评阅人：郝朗松、张翔答辩委员会主席：彭慈军论文答辩日期：2015年5月16日二〇一五年五月大鼠肝脏缺血-再灌注中线粒体DNA损伤与修复机制的初步研究专业：普通外科硕士研究生：余曦导师：张莹、孙诚谊【摘要】目的：本课题针对临床上肝脏缺血-再灌注损伤(hepaticischemiareperfusioninjury,HIRI)中线粒体DNA损伤与修复的机制进行初步研究，主要有如下几点：1、肝

5、细胞线粒体DNA（mitochondrialDNA,mtDNA）损伤引起细胞凋亡的机制；2、mtDNA损伤的常见位点；3、线粒体聚合酶γ修复受损mtDNA的途径及靶点；4、雷帕霉素对线粒体的保护作用及机制。对上述问题从基因水平探讨mtDNA损伤在肝脏缺血-再灌注损伤中的作用，为肝脏缺血-再灌注损伤的治疗提供理论依据。方法:第一部分：肝脏缺血-再灌注中线粒体DNA损伤及修复的机制，建立大鼠全肝缺血-再灌注损伤模型，测定血清AST、ALT；取出肝脏作病理学检测；mtDNAD-loop区扩增测序，查找变异位点；RT-PCR检测肝组织内线粒体DN

6、A聚合酶γmRNA的表达情况。第二部分：雷帕霉素在肝脏缺血-再灌注中对肝细胞线粒体的保护机制，建立大鼠全肝缺血-再灌注损伤模型，用雷帕霉素进行干预。提取肝组织蛋白，westernblot检测细胞色素C蛋白表达水平；取肝脏组织行原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝细胞凋亡。结果：第一部分：肝脏缺血-再灌注后早期（24h），大鼠血清AST、ALT均升高，肝组织病理学变化较重，线粒体DNA聚合酶γmRNA表达量均升高，其中雷帕霉素干预组AST、ALT及肝组织病理学改变和线粒体DNA聚合酶γmRNA表达量明显低于未给药组（p<0.01）；2

7、4h后血清AST、ALT均降低，为给药组线粒体DNA聚合酶γmRNA表达量逐渐降低，雷帕霉素干预组则较未给药组为低（p<0.01）且术后一直维持在同一水平；雷帕霉素干预组mtDNAD-loop区DNA突变率明显低于未给药组（p<0.01）。第二部分：肝脏缺血-再灌注后各时间点,大鼠肝脏细胞色素C表达水平均升高，其中雷帕霉素干预组细胞色素C的表达水平较未给药组为低（p<0.01），24h后各组细胞色素C的表达水平逐渐降低，但各时间点雷帕霉素干预组细胞色素C的表达水平均较未给药组为低（p<0.01）。各组各时间点检测肝细胞凋亡与细胞色素C表达

8、水平的变化相同，即各时间点雷帕霉素II干预组肝细胞凋亡水平均较未给药组为低（p<0.01）。结论：（1）肝脏缺血-再灌注损伤中存在线粒体DNA突变，且突变率与缺血时间呈正相关，而雷帕霉素降低线