体内、体外研究骨桥蛋白(osteopontin)与骨肉瘤肺转移的关系

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1、分类号密波UDC编号硕壬学位论文体内、体外研究骨桥蛋白(OsteopontW与骨肉疫肺转移的关系TheresearchofcorrelationsbetweenosteoontinOPNp()?exre*pssionandosteosarcomaulmonarmWas化sis:沁v'Voand'舟地/0py李巧导师姓名史占军专业名称骨外科(关节与骨病外科)培养类型专业学位论文提交日期2015年3月8日南方医科大学2012级硕±学位论文体内、体外研究骨桥窒白(Osteopontin与)

2、骨肉瘤肺转移的相关性TheKsearchofcorrelationsbetweenOS化opontinOPN()exressionandosteosarcomaulmonarmetas化sis:ppyinvivoandinvitro课题来源:广东省自然科学基金(S2012010009184):骨肉瘤肺转移相关的蛋白组学分析及候选蛋白的验证学位申请人李敏导师姓名史占军专业名称骨外科培养类型专业学位培养层次硕去研究生所在学院第一临床匿学院2015年3月8日广州硕壬学位论文体内、体外研究骨桥蛋白

3、(Osteopon村n)与骨肉瘤肺转移的关系硕击研究生:李敏指导老师:史占军摘耍-骨肉瘤是儿童和青少年最常见的原发恶性骨肿瘤。约80%90%的骨肉瘤发,尤其是化骨近端、股骨远端和腔骨近端。1970年W前生在长管状骨干號端,一5年生存率不足20%对于无转移的骨肉瘤般采取截肢手术治疗,其,随着新辅,患者生存率得到明显改善助化疗的应用和手术技术的提高。目前,骨肉瘤患3年无瘤生存率已上升到60-70%5年无瘤生存率和5年生存率分别为57%和者,66%10057%。30,年无瘤生存率和1年生存率分别为巧%和多年来,随着手术及化疗水平的逐步提高,局限性骨肉

4、瘤患者的长期生存率己经高达70%,但合并肺部转移患者的5年生存率却没有明显提商,仍然低于30%,肺部转移是导致骨肉瘤患者死亡的主要原因。约有20%的患者在骨肉瘤确诊的时候,就已经发?。2050%现有肺部转移其余确诊时未发现肺部转教的骨肉瘤患者中,约有在治疗期间或治疗结束后也会发生肺部转移。因此预防及早期诊断骨肉瘤的肺部转移是目前提高骨肉瘤疗效的关键。一骨桥蛋白(OPN)是种分泌型黏合糖蛋白,分子量为44kDa,分子中也一一-民GD序ArG-有个特殊的列(glAsp是首次发现在骨姐织中的种唾液酸糖蛋y),白、巨懂细胞、血管平滑肌细胞和很多上皮细胞中都有,随后

5、发现在肾脏、脑表达。OPN能通过特定的信号通路参与细胞的黏附、迁移等生物学行为的调节。近些年发现OPN与恶性肿瘤的侵袭、转移及増殖等多种病理过程密切相关。I中文摘要1?研究目的本研究通过构建骨肉瘤肺转移小鼠模型,检测OPN在骨肉瘤原位瘤和肺转移瘤中表达水平的差异。通过OPN特异性siRNA质粒抑制OPN表达,检测OPN抑制后细胞的体外侵袭力。2郁究方法2.1体内验证OPN蛋白在骨肉瘤原位瘤和肺转移痕中表达水平的差异。用山C低ra化巧光基因转染骨肉瘤细胞K7M2细胞株,用动物活体成像仪检-测转染强度,G418进行筛选8。,CCK评价转染后细胞活性

6、将转染后的K7M28细胞配制成5xl0/ml细胞悬液,5化1细胞悬液经右侧膝关节注射到ba比/C小鼠的腔骨髓腔,注射后用动物活体成像仪观察肿瘤的生长情况及肺转移情况。待检测到肺肿瘤信号(注射后8周)后继续观察4周。处死小鼠,收集肺組织中较大的肿瘤灶,原代培养骨肉瘤细胞,再次重复^1上^实验1次,获得具有高转移潜能的骨肉瘤细胞。传H代后再次转染炎光基因,转染后继续传代培养。待8细胞数足够多时配制成5xl〇/ml细胞悬液50山,将的悬液注入小鼠腔晉髓腔。每3天检测肿瘤原位成瘤及肺转移情况。待小鼠明显巧瘦呈恶病质(约注射后6周)可检测到瘤体和肺转移的巧光信号,继续观

7、察4周后,处死小鼠,收集bt腔骨原位瘤、肺转移病灶和正常骨组织。采用westernlo在蛋白质水平验证OPN在骨肉瘤原位瘤和肺转移瘤中表达水平的差异。通过免疫组织化学染色技术验证原位瘤和肺转移瘤中OPN蛋白表达差异。2.2OPN蛋白功能的体外验证。iRNAl、2、3和非特异性siRNA体外合成OPN基因的特异性snsSiRNA,()L-ipofectamine2000介导转染到骨

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