人参皂苷rb1抗小鼠脑及人脐静脉内皮细胞衰老的机制

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1、中山大学硕士学位论文人参皂苷Rb1抗小鼠脑及人脐静脉内皮细胞衰老的机制StudyontheMechanismsofGinsenosideRb1inmicebrainandHUVECsagainstsenescence学位申请人:彭沛指导教师:钱孝贤教授学科专业:内科学答辩委员会主席：答辩委员会委员：本课题获得国家自然科学基金资助项目（NO.81370447）、广东省自然科学基金资助项目（NO.S2012020010924）、广东省科技计划项目(NO.2011B031800024；NO.2011J4100107)资助中山大学附属第三医院广州原创性声明本人郑重声明:所呈

2、交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:日期:年月日中山大学硕士学位沦文：人参皂苷Rb1抗小鼠脑及人脐静脉内皮细胞衰老的机制人参皂苷Rb1抗小鼠脑及人脐静脉内皮细胞衰老的机制专业：内科学学位申请人：彭沛导师：钱孝贤教授中文摘要实验目的随着经济的发展，人们生活水平不断提高，平均寿命增加，老龄化成为世界性趋势。衰老成为许多疾病的主要危险因

3、素，如心血管疾病、癌症、神经退行性疾病等，严重危害健康，影响生活质量，所以，研究衰老相关机制，防治衰老相关疾病对人类健康至关重要。现代医学研究发现人参对中枢神经、心血管、消化、免疫、内分泌、泌尿生殖等多系统有广泛的作用，可提高人体力、智力的活动能力，增强机体对有害刺激的非特异性抵抗力。人参皂苷是人参的主要有效成分，现已知人参皂苷单体有40余种，Rb1为其中一种。mTOR（mammalianTargetofRapamycin，mTOR）进化上十分保守，它与衰老密切相关；在自然衰老的动物模型中，mTOR通路失调，过度激活，一些抗衰老干预手段，如饮食限制可以逆转这一变化。

4、我们课题组已经证明，人参皂苷Rb1可以减轻由过氧化氢导致的人脐静脉内皮细胞损伤，其机制包括对抗氧化应激，对抗炎症，调节Sirt1/eNOS/NO轴等。但是人参皂苷Rb1对自然衰老的小鼠脑、复制性衰老的人脐静脉内皮细胞的作用及人参皂苷Rb1与mTOR通路的关系尚不清楚。根据目前研究背景，本研究拟解决以下问题：（1）人参皂苷Rb1是否可以改善小鼠脑I中山大学硕士学位沦文：人参皂苷Rb1抗小鼠脑及人脐静脉内皮细胞衰老的机制自然衰老及人脐静脉内皮细胞复制性衰老；（2）如果人参皂苷Rb1具有上述作用，那这一作用是否与mTOR通路有关？实验方法1.人参皂苷Rb1对自然衰老的小鼠

5、脑的作用：检测丙二醛（MDA）含量、单胺氧化酶-B（MAO-B）活性，westernblot方法检测PAI-1、p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K蛋白表达情况。2.建立人原代脐静脉内皮细胞（HUVEC）复制性衰老模型：通过细胞形态的变化、衰老相关染色（SA-β-gal）阳性率以及血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）蛋白的表达来评估。3.人参皂苷Rb1对复制性衰老HUVECs的影响：通过细胞形态的变化、衰老相关染色（SA-β-gal）阳性率以及PAI-1蛋白及mRNA的表达来评估。4.人参皂苷Rb1对复制性衰老HUVEC中mTOR/p70S6

6、K通路的影响：Westernblot方法检测p-mTOR、mTOR、p-p70S6K、p70S6K蛋白的表达。5.人参皂苷Rb1对复制性衰老HUVEC中氧化应激的影响：TBA法检测细胞内丙二醛（MDA）水平，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性，Westernblot方法检测SOD1蛋白的表达。结果1.与青年小鼠比较，老年对照组小鼠脑中的MDA含量增多，MAO-B活性增加，PAI-1蛋白表达增多，mTOR蛋白及p70S6K蛋白磷酸化水平增加。2.与老年对照组比较，注射Rb1小鼠的脑MAO-B活性，mTOR蛋白及p70S6K蛋白磷酸化水平均降低；此外，注射高

7、剂量（20mg·kg-1·d-1）Rb1组MDA含量、PAI-1蛋白的表达减少。3.CPDL>16~26时，人脐静脉内皮细胞复制性衰老模型可成功建立。4.80μmol/LRb1可以有效的减轻人脐静脉内皮细胞复制性衰老。5.mTOR/p70S6K在复制性衰老HUVECs中表达增加，而人参皂苷Rb1可以有效抑制其增加。6.人参皂苷Rb1可以使衰老的HUVECs中SOD1活性增加，MDA产生减少。II中山大学硕士学位沦文：人参皂苷Rb1抗小鼠脑及人脐静脉内皮细胞衰老的机制结论1.人参皂苷Rb1可以减轻小鼠脑和人脐静脉内皮细胞的衰老；2.人参皂苷Rb1抗小鼠脑和人脐静脉