探索木瓜蛋白酶酶解蚕蛹蛋白动力学的研究

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1、广西大学硕士学位论文木瓜蛋白酶酶解蚕蛹蛋白动力学的研究姓名：金维维申请学位级别：硕士专业：化学工艺指导教师：廖丹葵20100501木瓜蛋白酶酶解蚕蛹蛋白动力学的研究摘要广西具有丰富的蚕蛹资源，蚕蛹蛋白作为一种优质的蛋白被人们广泛的重视，以蚕蛹蛋白为原料经过蛋白酶水解生成生物活性肽具有很大的利用价值和市场前景。本文研究了木瓜蛋白酶酶促水解蚕蛹蛋白的反应过程，建立了可控水解动力学模型和四集总动力学模型，并估算出模型参数和实验验证。主要内容包括：确定超声波辅助石油醚萃取蚕蛹原料的脱脂工艺，最佳工艺条件为：提取时间30min、固液比1：5、超声

2、功率250W，萃取一次，此时蚕蛹粉中蛋白质含量为84．26％。并高效液相色谱法分析蚕蛹蛋白中氨基酸的种类和含量，结果表明蚕蛹蛋白中氨基酸种类齐全，其中8种必需氨基酸占总量的60％，是一种优质的蛋白原料。采用福林法测定了木瓜蛋白酶在不同温度下的酶失活速率，考察了酶失活速率常数与温度的关系，得到木瓜蛋白酶失活速率方程。在木瓜蛋白酶酶解蚕蛹蛋白的过程中，考察底物浓度、酶浓度和温度对水解度影响，结果表明水解度与底物浓度的增大成反比，与酶浓度和温度的增加成正比。根据实验结果和经验公式推导出可控酶解动力学方程为一45．71eo+O．1794so)e

3、xp(-O．16DH)，同时对模型的准确性进行实验验证，结果显示在一定范围内模型可以表征木瓜蛋白酶．蚕蛹蛋白体系的反应规律。通过体积排阻色谱考查分析木瓜蛋白酶酶解蚕蛹蛋白反应的全过程，分子量大的多肽被逐渐水解成小分子多肽，随着反应的进行反应趋于稳定。确定了以分子量作为集总划分的标准，将整个反应产物分为四个集总组分。通过色谱分析，建立各集总组分的质量与色谱峰面积的线性关系，计算出反应不同时刻产物的质量浓度分布。在合理假设的基础上，根据反应机理建立体系的四集总反应网络，推导出各集总组分动力学方程，测定各集总组分的本征动力学常数，利用Marq

4、uardt法估算出反应网络的速率常数，并考察了个四反应网络的动力学常数与温度的关系。在35℃和45℃下，验证模型的准确性，结果表明：在一定范围内，模型能反映各集总组分的质量浓度分布，模型在35℃时的酶解实验误差较大，集总方法是分析木瓜蛋白酶酶解蚕蛹蛋白动力学一种有效的手段，但是模型的准确性和不足之处有待进一步探索和研究。关键词：蚕蛹蛋白质动力学可控酶解集总IIK腿TICMODELFORSILKWORMPUPAPROTEINHYDROLYZEDBYPAPAINGuangxihaverichresourcesinsilkwormpupa．P

5、roteinofsilkwormpupaissuperiormaterial．BioactivePeptideshydrolyzedbysilkwormpupaproteinhavegreatmedicalvalueandmarketprospect．Thisthesistriedtostudyontheproteolysisprocessofsilkwormpupaproteinreactionsystem，establishedthecontrollable-hydrolysisandfourlumpingkineticmodelu

6、singthelumpingmethodforenzymatichydrolysisofprotein．Themodels’parametersweretestedandcheckedveracityofmodels．Thecontentsmainlyincludedthefollowing：Ultrasonic—assistedextractionwasadoptedtoextractsilkwormpupaoilandpurifiedprotein．Theoptimalconditionis：extractiontime30min，

7、solid／liquidratio1：5，ultrasonicpower250Wandtime1．Inthiscondition，theyieldofproteinis84．26％．Areversed-phasehigh—performanceliquidchromatographicmethodforthedeterminationofaminoacidswasdescribed．Aminoacidsofsilkwormpupaproteinhadbeenanalyzed．Theresultillustratedtherewereat

8、least18kindsofaminoacidsinproteinsofsilkWOrminwhichthetotalquantityof8essentialaminoacidswasabove60％．It