莱茵衣藻纤毛内运输蛋白ift25和dyf-1的多克隆抗体制备

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1、■．，天津科技大学研究生学位论文（申请工程硕±学位）莱茵衣藻纤毛内运输蛋白ＦＴ２５和ＤＹＦ－１的Ｉ多克隆抗体制备Ｐ民ＥＰＡＲＡＴＩＯＮＯＦＰＯＬＹＣＬＯＮＡＬ乂ＮＵＢＯＤＹＯＦＴＲＡＮＳＰＯＲＴＩＮ１ＦＴ２５－ＬＩＡＯＦＰ民ＯＴＥＡＮＤＤＹＦ１ＩＮＴＨＥＣＩＣＨＬＡＭＹＤＯＭＯＮＡＳＲＥＩＮＨＡＲＤＴＩＩ■．－ｊ－，＾Ｉ？？Ｉ工程领域名称：食品工程＇苗’．ｉ；，指导教师：樊振川教授．Ｖ＇‘．ＩＶ

2、－．－＇亦Ｖ；研究生姓名：王震？Ｖ．申请学位类别；工程硕±全日制）．Ｖ．（，，．：？＇１！－．．、／一？０３论文提交曰期：２０１６年月．知■－＜Ｉ一．．＇＇．．．’－－．．．．．．．．Ｖ．＇＇’’－？人＇．＂下‘：一．一；■－■■＇＾：，Ｔ气分类号：Ｑ８１６学校代码：１００５７６９密级：研巧生学号：１３８０８９莱茵衣藻纤毛内运输蛋白ＦＴ２５和ＤＹＦ－１Ｉ的多克隆抗体

3、制备ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮＯＦＰＯＬＹＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＹＯＦＴＲＡＮＳＰＯＲＴＰＲＯＴＥＩＮ－ＩＦＴ２５ＡＮＤＤＹＦ１ＩＮＴＨＥＣＩＬＩＡＯＦＣＨＬＡＭＹＤＯＭＯＮＡＳＲＥＩＮＨＡＲＤＴＩＩ工程领爆食品王程校内指导教师：樊振川教授企业指导教师：朱涛高级王程师研究生姓名：王震申请学位级别：工程硕±论文提交日期：２０１６年０３月课题来源：天津市应用基础项目学位授予单位：天津科技大学天津科技大学学位论文原创性声明本人郑重

4、声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究王作所取得的＾成果。除文中特别加心标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文研巧做出重要贡献的个人和集体，均己在文中Ｗ明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：主來日期：＞＾年月皆日知识产权和专利权保护声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研巧经费支持，其数据和研巧成果

5、归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科技大学下完成的；所涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后，本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：ｉ－１日期；年巧月皆日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，同意公布论文的全部或部分内容，允许论文被查阅和借阅。

6、本人授权天津科技大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。＂＂保密［］（请在方框内打Ｖ），在年解密后适用本授权书。本学位论文属于＂＂不保密（请在方框内打Ｖ）。！□。一Ｗ年５作者签名：日期；月日。导师签名：日期；年３月ｏｒ日摘要纤毛维持正常的功能需要纤毛内各种纤毛运输蛋白的协同作用，近年来对纤－毛内各种运输蛋白功能的研究和报道越来越多ＩＦＴ２５和ＩＦＴＤＹＦ１。７０（）都是－ＩＦＴＢ复合

7、物中的姐分，参与纤毛内蛋白的运输，但是两者在莱茵衣藻中的研究ＦＴ２５０ＤＹＦ－报道较少。在莱茵衣藻中研究Ｉ和ＩＦＴ７１）的功能离不开两种蛋白对（一５７０ＤＹＦ－试验工具，应的抗体这。本试验尝试制备ＩＦＴ２和ＩＦＴ（１）的多克隆抗体并用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ检测其特异性。首先用ＰＣ民的方法将目的基因从含有含有该基因片段的质粒中扩增出来（由－ＭＡＬ－于ｄｙｆ１全基因较长，只扩增出Ｗ部分片段）分别构建到ｃ２Ｘ、ＰＧＥＸ２ＴｐＥＴ－２８ａ＋－和表达载体上，最终获得六种构建好质粒ＭＡ

8、Ｌｃ２Ｘ２５、ｐ（）ｐ诉Ｘ－２Ｔ－Ｔ－２８ａ＋－２Ｘ－－２Ｔ－ｐＧＥ？２５、阳（）ｚ／＇２５和ｐＭＡＬｃ喊／ＰＧＥＸ喊ｙｙＳＷ、ｉ／－＋－－ＤＥｐＥＴ２８ａＷＷ；。将六种质粒转化到大肠杆菌化２１（３）中，ＩＰＴＧ诱导表（）々／ＤＳ－－达，超声波破碎，ＳＰＡ細分析融合蛋白水溶性，结果为融合蛋白ＭＢＰＩＦＴ２５一Ｔ－ｘ－ＩＦＴ２５只有部分呈水溶性ＨｉｓＩＦＴ２５呈水溶性、ＧＳ、６呈水不溶性、－－－ＭＢＰ－Ｄ