新型肝炎病毒感染体系构建及抗病毒先天免疫应答研究

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1、学校代号10532学号B1222S006分类号密级博士学位论文新型肝炎病毒感染体系构建及抗病毒先天免疫应答研究学位申请人姓名杨大荣培养单位生物学院导师姓名及职称朱海珍教授学科专业化学研究方向分子病毒学与免疫学论文提交日期2015年5月学校代号：10532学号：B1222S006密级：湖南大学博士学位论文新型肝炎病毒感染体系构建及抗病毒先天免疫应答研究学位申请人姓名：杨大荣导师姓名及职称：朱海珍教授培养单位：生物学院专业名称：化学论文提交日期：2015年5月论文答辩日期：2015年5月答辩委员会主席：刘选明教授Theinvestigationofantiviralinnateimmnueresp

2、onseinanovelinfectioussystemforhepatitisvirusbyYANGDarongB.S.(HunanUniversity)2010AdissertationsubmittedinpartialsatisfactionoftheRequrimentsforthedegreeofDocterofScienceinBiologicalChemistryintheGraduateSchoolofHunanUniversitySupervisorProfessorZHUHaizhenJun,2015湖南大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师

3、的指导下独立进行研究所取得的。研究成果除了文中特别加Ｗ标注引用的内容外，本论文不包含任何其它个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中１＾＾明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：；＃乂日期：庐／５年＾月八日＾学位论文版权使用授权书＼本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检。索，可Ｗ采巧影印、缩印或扫描等复制手段保存

4、和汇编本学位论文本学位论文属于１．保密□，在密后适用本授权书。年解２．不保密ｅ／。＂”请在上相应方框内打Ｖ（）作者签名：奇日期：从／衣年＾月／口日口导师签名曰期；ｗ／ｊｒ年＾月／日博士学位论文摘要全球有超过5亿人口属于丙型肝炎病毒（HCV）和/或乙型肝炎病毒（HBV）慢性感染人群，这些感染者有可能逐步发展为慢性肝炎、肝硬化和肝癌。因缺少理想的病毒感染体系而制约了病毒生活周期、先天免疫反应以及发病机制的相关研究，从而阻碍了研发抗病毒药物的进程。尽管乙肝病毒的预防性疫苗早已上市，HCV疫苗却还未研发成功。相比于其它大部分的病毒感染，HCV感染的主要特征是极易形成慢性感染（

5、约80%）。另一方面，约有20%的HCV感染者能够自动清除体内病毒而不需要接受治疗，表明宿主的先天免疫反应可以控制病毒感染。在病毒感染过程中，诱导I型干扰素和干扰素刺激基因（ISGs）是宿主抵御病毒的主要方式。宿主通过模式识别受体（PRRs）捕获病毒感染所形成的病原体相关分子模式（PAMPs），激活先天免疫应答系统。主要的PRRs包括RIG-I样受体（RLRs）、Toll样受体（TLRs）、Nod样受体（NLRs）和蛋白激酶R（PKR）。然而，HCV和肝细胞抗病毒先天免疫反应之间的复杂相互作用机制未知。本研究工作旨在研发一个理想的HCV和HBV感染细胞培养体系，并基于此体系探究宿主应答病毒感染

6、的先天免疫机制。第一，我们成功分离了一株新型肝癌细胞系HLCZ01。该细胞系来源于一位患有高分化肝癌的男性病人的肝组织。HLCZ01细胞的形态酷似人正常原代肝细胞（PHH），并表达多种肝细胞特异性标志物，包括白蛋白（ALB）、α1-抗胰蛋白酶（AAT）、肝细胞核因子4（HNF4）、细胞色素CYP3A4和miR-122。同时，HLCZ01细胞还表达HCV的四种受体，分别为CD81、SR-BI、CLDN1和OCLN。第二，HLCZ01细胞系支持HCV和HBV感染的完整生活周期。HLCZ01细胞既支持实验室来源和临床病人血清中的HCV感染和复制，又支持体外来源的和体内病人血清来源的HBV感染和复制。

7、从病毒感染的HLCZ01细胞中组装和释放的HBV和HCV可以再感染原始的HLCZ01细胞。HLCZ01细胞支持HBV和HCV共感染，并且这两种肝炎病毒在HLCZ01细胞中的复制互不干扰。抗HBsAg和抗CD81特异性抗体可分别阻断HBV和HCV入侵HLCZ01细胞。已开发的抗病毒药物可有效抑制HBV和HCV在HLCZ01细胞中的复制。HLCZ01是世界首例支持HBV和HCV病人血清直接感染以及HB