抵抗素对自发性高血压大鼠肥厚心肌腺苷酸活化蛋白激酶信号通路的影响

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1、分类号密级ＵＤＣ编号硕壬学位论文抵抗索对自发性巧血压大鼠化厚记肌腺普敌活化蛋白巧巧信号通路的巧响Ｅｅｃ－ｆｆｔｓｏｆＲｅｓｉｓｔｉｎｏｎＡＭＰａｃｔｉｖａｔｅｄｒｏｔｅｉｎｋｉｎａ说ｓｉｎａｌｉｎｐｇｇｐａｔｈｗａｙｉｎｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔ刘一巧导师巧名李志巧巧巧专化名称内科学（也血管巧学）培养类型学术型论文巧。日巧州１Ｓ年Ｓ月１８日兩方医科大学２０１２级硕壬

2、学位论文抵抗素对自发性高血压大鼠肥厚心肌腺巧酸活化蛋白激酶信号通路的影响－ｎａｓｅＥｆｆｅｃｔｓｏｆＲｅｓｉｓｔｉｎｏｎＡＭＰａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏ化ｉｎｋｉｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｉｎｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔ课题来源：自选课题学位申请人刘一炫导师姓名李志操教授专业名称’。血管内科培养类型学术型培养层次硕去研究生所在学院第二临床学院答辩委员会主席陈爱华教授答辩姜员会委员郭志刚教

3、授刘品明教授王讳教授向定成教授２０１５年０５月１８日广州硕壬学位论文抵抗素对自发性高血庙大鼠肥厚心肌腺巧酸活化蛋白激酶信号通路的影响硕±研究生一：刘炫指导老师：李志樣教授摘要一、研究背景和立题依据一也肌肥厚是导致也力衰竭、也律失常和巧死主要原因之。本课题针对也一肌肥厚的产生机制：祗抗素／脂联素／ＡＭＰＫ这通路对也肌肥厚的影响提出。本课题对寻找新的治疗也肌肥厚及也衰的鞭点有重要意义。实验由体内、体外实验完成，是在前人研究抵抗素、脂联素与也肌肥厚相

4、关，激活腺巧酸活化蛋白一激酶（ＡＭＰＫ）可抑制也肌祀厚基础上进步深入探讨，通过注射载有抵抗素基因重组腺病毒注射液造模，并观察抵抗素对其血压收缩压（ＳＢＰ）和脂联素（ＡＮ）及其下游蛋白酶ＡＭＰＫ信号转导子的影响。阐明抵抗素／脂联素／ＡＭＰＫ在也肌。肥厚形成中的重要作用，为也肌肥厚的治疗提供新的靴点二、研究目的探讨抵抗素对自发性离血压大鼠（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｒａｔ，ＳＨＲ）肥厚也肌腺巧酸活化蛋白激酶信号转导分子改变的影响。注射载有抵抗素基因重组

5、（ＳＢＰ）腺病毒注射液大鼠造模，并观察抵抗素对其血压收缩拒和脂联素（ＡＮ）信号转导子的影响。Ｓ、材料与方法１．实验药品及主要试剂。大鼠脂联素ＥＬＩＳＡ检测试剂盒，美国ＡＤＬ公司载有抵抗素基因重组腺病毒注射液＾ｌＯｌＯＰＦＵ，３ｍｌ，上海吉凯基因化学技术有限公司。抗磯酸化ＡＭＰＫＩ摘要抗体购自美国ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司，非磯酸化ＡＭＰＫ抗体购自美ａｎ－－国ＳｔａＣｒｕｚ公司，Ｔｒｉｚｏｌ试剂购自美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ

6、公司，０１ｉｇｏｄＴ、ＭＭＬＶ逆转录酶、ＲＮＡ酶抑制剂及Ｔａｑ酶购自美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司，其他试剂均为分析纯产品。２方法２．１实验动物－８周龄Ｗｉｓｔａｉ大鼠及ＳＨＲ大鼠，１８０２００，，雄性体重ｇ分别购自中山大学实验动物中也和北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号分别为２０－－ＳＣＸＫ（粤）１３０００１和ＳＣＸＫ２〇Ｂ００〇２。Ｗ８周龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠作为正常对巧）照，将同周龄ＳＨＲ大鼠按体重随机分为４组，即ＳＨＲ组，高剂量组（载有抵抗素基

7、因重组腺病毒注射液，剂量：レ１０９ＰＦＵ／只），中剂量组（载有抵抗素ｘ基因重组腺病毒注射液，剂量：〇Ｊｌ〇９ＰＦＵ／只），低剂量组（载有抵抗素基因重組腺病毒注射液，剂量：０．２５Ｘ１０９ＰＦＵ／只）。２．３ＥＬＩＳＡ检测血清脂联素水平经腹主动脉取血至离也管中，室湿静置Ｉｈ，３０００ｒ／ｍｉｎ离也１０ｍｉｎ后吸取血清，按试剂盒说明书测定血清脂联素水平。２－ｏＲｌ的表达．４ＲＴＰＣＲ检测也肌Ａｄｉｐ采用Ｔｒｉｚｏｌ试剂盒提取也肌组织ＲＮＡ，琼脂糖凝胶电泳鉴定ＲＮＡ完整性

8、，紫外分光光度法测定ＲＮＡ的浓度和纯度。取ＲＮＡ５ｕ逆转录合成ｃＤＮＡ，ｇ。进行半定量ＰＣＲ反应。根据序列设计相应引物，引物序列见表１ＰＣ民的扩‘’‘‘Ｃ预ｎＣ４Ｓ－－ｍＣ４ＣＳ増条件是：９４变性５ｉ，９４５５７５Ｓ７２６０，３０个循环后’Ｃ７２充分延伸１０。ＰＣＲ产物经１．５％琼脂糖凝胶电泳，凝胶扫描系统ｍｉｎ—－（ＤＦ２３Ｂ）英国ＵＶＰ公司产品ＨＺ２５。采用５５０ＩＷ图像分析系统（ＬＥＩＣ