电针内关、神门、合谷对心肌肥厚模型大鼠erk通路影响的比较研究

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1、湖北中医药大学博士学位论文电针内关、神门、合谷对心肌肥厚模型大鼠ERK通路影响的比较研究姓名：李佳申请学位级别：博士专业：针灸推拿学指导教师：王华20120526摘要目前，临床研究证实针灸能有效改善心肌肥厚患者的心功能，实验研究从针刺对缺血心肌功能的调整、心肌细胞结构及血管活性物质的改变、能量代谢障碍的调节、氧自由基生成的减少、抗心肌缺血的中枢神经机制及分子生物学机制等多方面进行了探讨，普遍认为针刺能够积极有效保护心肌细胞。但未见从细胞外信号调节激酶ERK研究电针不同经脉(穴)治疗心肌肥厚的相关报道。本实验试图从与心相关的内关穴及与心无直接联系但处于同一解剖水平段的神门、合谷

2、穴对心肌肥大损伤调整作用予以对比研究。目的：本课题拟在中医针灸“胸胁内关谋"临床经验的指导下，借鉴针灸治未病的学术特点，从细胞、分子水平研究针刺对心肌肥厚模型大鼠心肌组织病理形态结构、心电活动、神经内分泌系统CA类神经递质以及AngII和ET、ERK信号通路的调节机制，并比较心经、心包经、大肠经上处于同一解剖水平段的神门、内关、合谷三组穴位间的疗效，为经脉(穴)．脏腑相关提供实验依据。方法：采用三月龄清洁级雌性SD大鼠105只，体重1714-4．29，随机数字表法分为7组：正常组，模型组，神门组，内关组，合谷组，抑制剂组，内关+抑制剂组，每组15只。采用经典的皮下注射盐酸异丙

3、肾上腺素制备大鼠左心室心肌肥厚模型，电针内关、神门、合谷穴进行比较。针刺操作方法：造模同时分别针刺大鼠双侧上述3穴，大鼠穿自制鼠衣，用o0．30mmx15mm毫针直刺穿皮达筋间，捻转lmin后，接HANS．200型电针治疗仪，左右各接一电极，连续波，频率2Hz，强度lmA，通电治疗20min，14d。抑制剂PD98059以0．3mg／kg／d的剂量腹腔注射进行干预。所有大鼠实验结束后称取体重，待心电图观察结束后取材：心内采血取血浆，然后摘取心脏分离左心室称重，计算心肌肥厚指数。取左心室游离壁中部心室肌，显微镜下观察心肌细胞病理结构；I-IPLC检测血浆中儿茶酚胺类递质及代谢产

4、物含量；放射免疫法检测心肌组织AngII、ET含量；免疫印迹法检测左心室ERKl／2、P．ERK蛋白的表达，并对数据进行统计分析。结果：1．针刺对大鼠心肌组织病理结构的影响：正常大鼠心肌纤维排列整齐，毛细血管丰富，内皮细胞未见水肿；心肌细胞形态完整，细胞核电子密度均匀，核仁完整，细胞凋亡较少见；肌丝及肌小节结构清晰可见，线粒体丰富，结构完好，胞质内细胞器结构清晰可见，未见水肿及空泡变。造模后，大鼠心肌细胞光学显微镜下主要表现为以下三个方面：心肌纤维排列紊乱，心肌间质增生，心肌间质纤维化；透射电镜下主要表现为以下六个方面：线粒体肿胀、细胞凋亡增多、内皮细胞间质增生、肌浆网扩张、

5、收缩带收缩不同步、闰盘变形。其余5组大鼠在上述六方面均有不同程度的改善；2．针刺对大鼠心电图的影响：实验观察到，大鼠造模后心电图ST段，R-R间期于造模14d后明显升高，而心率明显降低，与正常组比较，有极显著性差异(ST段，R-R间期，P<0．05；心率，PO．05)；3．针刺对大鼠心肌肥厚指数的影响：大鼠造模后心脏质量明显增加，与正常组相比，有极显著性差异(PO．05)；大

6、鼠全心质量指数和左心室质量指数于造模14d后明显升高，与正常组比较，有极显著性差异(P0．05)；4．针剌对大鼠血浆中儿茶酚胺类神经递质的影响：大鼠血浆中Ⅱ儿茶酚胺类神经递质(NE、E、DA；肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺)及代谢产物(MHPG、HVA、DOPAC；3．甲氧基．4．羟基苯乙二醇、高香草酸、3,4．二羟基苯乙酸)含量于造模14d后明显升高，与正常组比较，有显著性差异(

7、P<0．05)；抑制剂干预及电针治疗后，大鼠儿茶酚胺类神经递质及其代谢产物含量减少，与模型组比较，有显著性差异(PO．05)；5．针刺对大鼠心肌组织中AngII和ET的影响：大鼠心肌组织中AngII和ET含量于造模14d后明显升高，-9正常组比较，有显著性差异(P<0．05)；抑制剂干预及电针治疗后，大鼠心肌组织AngII和ET含量减少，有显著性差异(P<0．05)，其余各组间比较无显著性差异(P>0．05)；6．针刺对大鼠左心室心肌组织中ERKl／2、P．