抗菌肽dybowskin-2cdya的克隆表达及其在家禽饲料中的应用

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1、分类号：ＴＳ２０１．３密级；ＵＤＣ：６３４．７乂ｆ餐读义嗦４轉女《化俗抗菌肋就？的克隆表达及其在家禽饲料中的应用’李强指导教师姓名岳喜庆教授沈阳农业大学沈阳市东陵路１２０号申请学位级别博±专业名称食品科学论文提交日期２０巧年４月巧日论文答辩日期２０巧年６月１２日学位授予单位和日期沈阳农业大学２０１５年６月３０日答辩委员会主席刘宏生教授评阅人孟宪军教授吴朝霞教授匿名１教授匿名２教授．匿名３教授２０巧年６月１２日ＣｏｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｒｅｓｓｉ

2、ｏｎｏｆＡｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌＰｅｔｉｄｅｐｐ－ＤＹＢＯＷＳＫＩＮ２ＣＤＹＡａｎｄｉｆｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｏｕｌｔｒｆｅｅｄｐｙＣａｎｄｉｄａｔｅ；ＬｉｉａｎＱｇＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＹｕｅＸｉｑｉｎｇＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅＲｅｓｅａｒｃｈＦｉｅｌｄ：ＡｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌＰｅｔｉｄｅｐＳｈｅｎｙａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ６２０１５，独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得

3、的研究成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得沈阳农业大学或其它教育机构的学位或证书一而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。：研究生签名：时间＾：年如＾＾吵如导师签名：秦时间：年月日為秦关于论文知识产权和使用授权的说明本论文的知识产权为沈阳农业大学所有。本人完全了解沈阳农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被査阅、。和借阅

4、，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存汇编学位论文同意沈阳农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表。、传播学位论文的内容学位论文中的所有内容不经沈阳农业大学授权不得Ｗ任何方式擅自对外发表。（保密的学位论文在解密后应递守此协议）研究生签名：？：时间＜乂月Ｔ曰（＞少年（Ｊ导师签名Ｐ：年月日＾ｉ；时间沈阳农业大学博±学位论文￣￣Ｉｍ摘要１Ａｂｓｔｒａｃｔ３一第胃前胃６１．１６１．２影响抗菌肤抗菌活性的因素７１．２．１螺旋度７１．２．２疏水性７１．２．３两亲性８

5、１．２．４正电荷数８１２．．５特殊氨基酸的作用８１．３抗菌化的改造方法８１．３．１氨基酸残基替换８１．３．２截取天然抗菌肤的部分序列９１．３．３设计融合肤９１．３．４螺旋轮法９１．４枯草芽袍杆菌表这系统的研究进展９１．５抗菌化在饲料中应用研究进展１０１．５．１禽类饲料应用１０１．５．２畜类饲料应用１１１．５．３水产饲料应用１１１．５．４饲料应用存在的问题１２１．６实验目的及意义１２第２章东北林蛙皮肤抗菌狀基因的克隆和序列分析１３２ｌｉ３１１３

6、胃２．２欄１３２．．２１实验动物１３２．２．２克隆载体与茜种１３２．２．３酶与试剂１３２．２．４主要仪器和设备１３２．２．５试剂与培养基的配制１４２．３施１６２１６．３．１设计东北林蛙抗菌肤通用引物２．３．２提取东北林蛙皮肤总ＲＮＡ１６２．ｃＤＮ１７．３３东北林蛙抗菌肋基因的Ａ克隆１１＾２２０．４结果２．４．１简并引物设计２０２．４．２东北林蛙皮总ＲＮＡ的提取结果２１２２１．４．３抗菌肤的ｃＤＮＡ扩增结果２．４．４重组质粒的ＰＣＲ检测验证２２

7、２．４．５测序结果及其序列分析２２２．４．６东北林蛙皮成熟抗菌肤的同源分析２５２．４．７东北林蛙皮抗菌肤成熟肤的结构分析２５２２６．５Ｗ论３ｂｏｗｓｋ－第章抗菌肤Ｄｙｉｎ２ＣＤＹａ的表达及功能测定２７３．１引胃２７３．２Ｗ料２７３．１．２菌种和载体２７３．２．２所用试剂与工具酶２７３．２．３所用设备与仪器２７３．２．４溶液与培养基的配制２８ｈ货也３０３３．１３０．实验思路３．１２引物设计３０３．３．３ＰＣＲ方法扩増Ｄｙ２成熟肋序列３０３．３．４

8、Ｄｙ２表达质粒的构建及序列分析３１３．３．５制各感受态酵母３２３．３．６线性ｐＰＩＣＺａ／Ｄｙ２转化毕赤酵母ＧＳ１１５３３３．３．