急性腹泻患者变形杆菌分子分型和耐药特征

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1、分类号：R378.2学校代码：10062密级：公开学号：2012602339硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：急性腹泻患者变形杆菌分子分型和耐药特征TITLEThemoleculartypingandantibioticresistanceamongProteusfromacutediarrhealpatients一级学科：临床医学二级学科：内科学传染病论文作者：郇娟指导教师：王玉宝天津医科大学研究生院二O一五年五月I分类号：R378.2学校代码：10062密级：公开学号：2012602339学位类别：科学学位□√专业学位学科门

2、类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：急性腹泻患者变形杆菌分子分型和耐药特征TITLEThemoleculartypingandantibioticresistanceamongProteusfromacutediarrhealpatients一级学科：临床医学二级学科：内科学传染病论文作者：郇娟指导教师：王玉宝天津医科大学研究生院二O一五年五月II学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表

3、或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日III天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的

4、：变形杆菌在食源性疾病病原菌中占有非常重要的地位，本研究以天津医科大学第二医院肠道门诊急性腹泻患者粪便标本中分离的变形杆菌为研究对象，进行PFGE分型，抗菌药物敏感性试验，1类整合酶基因、2类整合酶基因和变形杆菌中基因岛连接序列的PCR扩增和测序，分析菌株的同源性特点、耐药特征与可能的耐药播散机制，为了解多重耐药变形杆菌从食物和环境向人体的播散、防控变形杆菌引起的食源性疾病与抗菌药物的合理应用提供依据。材料与方法：1、收集2013年5月-10月天津医科大学第二医院肠道门诊急性腹泻患者粪便标本中分离的变形杆菌，利用传统分离培养法和以tuf基因为靶基因的PCR方

5、法对菌株进行分离鉴定。2、脉冲场凝胶电泳（PFGE）：提取变形杆菌菌株DNA，经限制性内切酶SfiI酶切后进行脉冲场凝胶电泳分析。3、药物敏感性试验：采用Kirby-Bauer纸片扩散法测定变形杆菌对氯霉素、链霉素、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、四环素、头孢曲松、头孢他啶、亚胺培南、环丙沙星等18种抗菌药物的耐药性，并分析变形杆菌的耐药特点。4、PCR方法扩增变形杆菌中1类整合酶基因、2类整合酶基因和变形杆菌中基因岛左右连接序列，对2类整合酶基因PCR扩增产物测序结果进行比对，分析其内部终止密码子是否有突变；分析菌株的耐药性与整合子、基因岛连接序列之间的关联。结果：

6、1、本研究用PCR方法和生化鉴定均检测出62株变形杆菌，其中生化鉴定出48株奇异变形杆菌，8株普通变形杆菌，4株产粘液变形杆菌，2株潘氏变形杆菌；基于tuf基因作为靶基因的PCR方法可以快速鉴定出腹泻患者粪便中的变形杆菌。2、62株变形杆菌共分为51个不同的PFGE带型，相似性在40%-100%之间。62株变形杆菌中分别有5株、3株、3株、2株、2株、2株菌各自具有100%相似度的PFGE带型，且各组菌株分离时间相近，提示本地区出现相同克隆株所致的聚集性感染。I天津医科大学硕士学位论文3、急性腹泻患者分离的变形杆菌呈现明显的多重耐药（26%）和ACSSuT耐

7、药（16%），少数菌株对亚胺培南中介、对三代头孢菌素耐药；出现了对临床重要抗菌药物（三代头孢菌素、氟喹诺酮和亚胺培南）都不敏感的菌株。4、1类和2类整合子的携带率分别为54%（27/50）和32%（16/50），1类和2类整合子均阳性的为26%（13/50）；2类整合子阳性的16株菌株中，有6株（37.5%）菌株的2类整合酶基因内部原来的终止密码子TAA突变为可编码氨基酸的密码子CAA；36%的菌株（18/50）耐药基因岛连接序列阳性。5、多重耐药菌株携带1类整合子（92.3%）、2类整合子（61.5%）以及同时携带这两类整合子（53.8%）的比例明显高于非

8、多重耐药菌株（P分别为0.001、0.014、0.0