家蚕幼虫血淋巴碱性蛋白的分离与鉴定

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1、江苏科技大学硕士学位论文家蚕幼虫血淋巴碱性蛋白的分离与鉴定2015年6月7日分类号：S881.2+4密级：公开编号：122300005家蚕幼虫血淋巴碱性蛋白的分离与鉴定学生姓名蔡忠新指导教师汪生鹏副研究员江苏科技大学2015年4月27日SeperationandidentificationofthebasicproteinsinthehemolymphofthelarvalsilkwormSubmittedbyCaiZhongxinSupervisedbyDr.WangShengpengJiangsuUniver

2、sityofScienceandTechnologyApril,2015江苏科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年月日江苏科技大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部

3、门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：(1)保密□，在年解密后适用本授权书。(2)不保密□。学位论文作者签名：指导教师签名：年月日年月日摘要摘要家蚕是一种重要的生物反应器，其一生经历四种不同的形态变化。在家蚕的形态变化过程中，血淋巴作为各个器官的外环境，对家蚕的形态变化有重大作用。血淋巴中的蛋白质表达繁多，涉及贮藏、免疫、营养、传递等功能，因此研究研

4、究血淋巴蛋白具有重要意义，而在家蚕血淋巴中，少量性质特异的碱性蛋白质可能具有特殊作用。实验采用离子色谱联合线性离子阱四级杆（LTQ）质谱分析的组合来分离分析家蚕血淋巴蛋白组成。取p50家蚕5龄3天血淋巴，在pH7.5的条件下，先后经过阴离子交换柱和阳离子交换柱进行蛋白分离，最后进行质谱分析。SDS-PAGE电泳显示主要的蛋白组份是80kDa蛋白和45kDa蛋白以及超过116kDa的蛋白。质谱鉴定出233种蛋白，其中有73种能够确定蛋白名称，在这些蛋白中有55种蛋白已有报道，另外18种蛋白未报道过，其中包括9种代谢

5、相关蛋白：死亡相关蛋白、泛素结合酶E2异构体2、胞嘧啶甲基转移酶、核切除修复蛋白rad32、真核翻译起始因子3亚基E、真核翻译起始因子3亚基C以及3种细胞色素蛋白P450；3种酶抑制剂以及酶相关蛋白：胰凝乳蛋白酶抑制剂SCI-II、S相激酶相关蛋白、CP8；2种信号传递相关蛋白：嗅觉受体9、触角特异蛋白3c；1种细胞组成蛋白：Actin-4；1种热休克蛋白：热休克蛋白90相关蛋白TRAP1；2种其它蛋白：Bm122、Kiser。在233种蛋白中有160种蛋白不能确定蛋白名称，其中有123种蛋白没有报道过。为了研究

6、一些蛋白基因在家蚕中的表达情况，从未报道的18种蛋白质中，选取5种蛋白，运用荧光定量PCR在p50家蚕和秋丰家蚕各组织中检测这些蛋白基因的表达谱，结果显示，Actin4在脂肪体、中肠、后部丝腺以及马氏管的表达量远远高于其他基因，而且在品系之间没有较大的差别；Kiser只在秋丰中肠和p50后部丝腺中有较高相对表达量，在其他组织中表达很少；S相激酶相关蛋白同样在秋丰中肠和p50后部丝腺中表达较高，在其他组织中表达较少，在p50脂肪体，p50马氏管，秋丰马氏管中相对表达量很低。泛素结合酶E2异构体2在两个品系的马氏管中

7、相对表达量很低，且在其他组织中表达量都较低。热休克蛋白90相关蛋白TRAP1在秋丰和p50的脂肪体、中肠、后部丝腺、马氏管中的相对表达量都非常低。实验表明离子色谱加质谱的方法对家蚕血淋巴蛋白的研究具有重要意义。关键词家蚕；血淋巴；碱性蛋白；离子交换层析；LTQ质谱IAbstractAbstractBombyxmoriisanimportantbiologicalreactor,itgoesthrough4stagesinitslife.Hemolymphplaysavitalroleinthesestages,b

8、ecauseofsupplyingnutrientsforotherorgans.Thehemolymphhasavarietyofproteinsrelatetostorage,immunity,nutrition,conveyanceandsoon.So,itissignificantforustoresearchtheproteinsinthehemolymphof