家蚕接种bmnpv后体内两种代谢酶活性变化及家蚕血淋巴金属蛋白的初步分离检测

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1、学校代码：10289分类号：S881.2密级：公开学号：122310014江苏科技大学硕士学位论文家蚕接种BmNPV后体内两种代谢酶活性变化及家蚕血淋巴金属蛋白的初步分离检测研究生姓名张蕾导师姓名李龙武国华申请学位类别农学硕士学位授予单位江苏科技大学学科专业特种经济动物饲养论文提交日期2015年4月27日研究方向家蚕金属组学研究论文答辩日期2015年6月3日答辩委员会主席程嘉翎评阅人2015年6月3日分类号：S881.2密级：公开学号：122310014农学硕士学位论文家蚕接种BmNPV后体内两种代谢酶活性变化及家蚕血淋巴金属蛋白的初步分离检测学生姓

2、名张蕾指导教师李龙武国华江苏科技大学二O一五年六月AThesisSubmittedinFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureVariationinActivitiesofTwoMetabolicEnzymesinSilkwormInoclulatedwithBmNPVandPreliminarySeparationandDetectionofMetalloproteininSilkwormHeamolymphSubmittedbyZhangLeiSupervisedb

3、yProfessorLiLongWuGuo-huaJiangsuUniversityofScienceandTechnologyApril,2015江苏科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年月日江苏科技大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位

4、论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：(1)保密□，在年解密后适用本授权书。(2)不保密□。学位论文作者签名：指导教师签名：年月日年月日摘要摘要家蚕也称桑蚕，是一种重要的经济昆虫，同时也是研究鳞翅目昆虫的重要模式生物。由BmNPV侵染引起的家蚕核型多角体病毒病，给蚕业生产造成巨大的危害和经济损失。病毒入侵会影响家蚕正常的生理代谢，尤其会引起体内多种酶

5、活性发生变化，有研究发现家蚕体内羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活性可能与家蚕的抗性有关，但其活性变化规律尚不明确。金属元素存在于家蚕体内，并伴随家蚕生长发育的各个阶段，金属元素是家蚕体内重要的组成部分，一般来说，生物体内的金属元素按含量的多少主要分为宏量元素和微量元素，大部分的金属元素通过与蛋白结合来参与各项生命活动。因此为了深入研究家蚕体内金属蛋白的结构和功能，对金属蛋白的分离与检测是必不可少的。本文选择对BmNPV具有抗性的家蚕品种及其非抗性非抗性品种作为试验材料，在5龄期对其添食BmNPV病毒，同时设不添食病毒的正常饲养组，通过测定添食病毒后血淋巴和中

6、肠组织中羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶的活性探讨了其活性变化规律，采用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法测定了家蚕血淋巴中11种金属的含量，并建立了体积排阻-高效液相色谱（SEC-HPLC）与电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）联用技术用于家蚕金属蛋白的分离检测。本文的研究结果如下：1.选取具有BmNPV抗性的家蚕品种及其非抗性非抗性品种，在五龄期添食BmNPV病毒，同时设不添食病毒的正常饲养组，而后连续5天取血液和中肠组织，测定其中羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶的活性，探讨了抗性品种及其非抗性非抗性品种家蚕接种BmNPV后体内羧酸酯酶（CarE）和乙酰胆碱酯酶

7、（AchE）活性的变化规律。结果表明，抗性品种在感染BmNPV病毒后其中肠中羧酸酯酶活性高于未感染的抗性品种，表明抗性品种对感染病毒做出了有效的应答和防御；而在感染病毒后抗性品种的中肠与血淋巴中乙酰胆碱酯酶活性变化相对较小。据此推测，抗性品种在感染病毒后仍保持了相对稳定的代谢过程。2.建立了用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法测定家蚕血淋巴中Na、Mg、K、Ca、Mn、Co、Ni、Cu、Fe、Zn、Rb等11种金属元素的分析方法。测定四组家蚕（正常抗性品种、添食病毒抗性品种，正常非抗性品种、添食病毒非抗性品种）结果发现，Na、Mg、K、Ca含量较

8、高，达到μg/mL级别，其余元素Mn、Co、Ni、Cu、Fe、Zn和Rb含量较低，在μg/L级别，其中Co含