定点编辑人jmjd3基因的talen质粒构建及jmjd3基因敲除对人宫颈癌细胞体外效应观察

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1、分类号：密级：UDC：学号：406521312493南昌大学硕士研究生学位论文定点编辑人jmjd3基因的TALEN质粒构建及jmjd3基因敲除对人宫颈癌细胞体外效应观察ConstructionofTALENvectorforjmjd3genesite-specificeditinginhumanandtheeffectsofJmjd3knockoutinhumancervicalcancercellsinvitro陈美花培养单位（院、系）：南昌大学第一附属医院指导教师姓名、职称：郭菲副研究员指导教师姓名、职称：刘丝荪教授申请学科的学科门类：医学学科专业名称：妇产科学论文答辩日期：2015年6月

2、答辩委员会主席：评阅人：2014年6月学位论文独创性声明一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。

3、本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）摘要摘要目的：利用TALEN技术构建编辑人jm

4、jd3基因的TALEN质粒，并观察Jmjd3敲除后人宫颈癌细胞体外生长情况。方法：构建编辑人jmjd3基因的TALEN质粒载体（TALEN左臂质粒L1及TALEN右臂质粒R1），经酶切鉴定，测序验证；用TALEN左臂L1、TALEN右臂R1、EGFP荧光质粒共同转染人宫颈癌细胞系Hela，同时设未转染的宫颈癌细胞为空白对照，转染24小时后计算转染效率。随后采用浓度为2ug/ul嘌呤霉素溶液进行筛选至空白对照组细胞全部死亡（>3d)，共转染组细胞继续培养，行RT-PCR检测宫颈癌细胞内jmjd3mRNA表达水平，MTT检测细胞增殖活力。结果：经酶切鉴定，DNA测序及blast比对分析证实成功构建

5、编辑人jmjd3基因TALEN质粒对；转染后Hela细胞与空白对照组相比，可见质粒共转染组jmjd3mRNA表达水平明显降低，表达抑制率为（46.5±2.0）%；MTT检测表明质粒共转染组细胞增殖能力明显受到抑制，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：1、针对人jmjd3基因位点人工构建的TALEN质粒，可实现对人基因组jmjd3基因位点的编辑。2、编辑jmjd3基因可使宫颈癌细胞系Hela细胞增殖能力明显受到抑制，说明jmjd3参与宫颈癌细胞增殖调控。关键词：TALEN；jmjd3；基因编辑；宫颈癌；细胞增殖AbstractABSTRACTObjectives:Toconstructio

6、nofTALENvectorforjmjd3geneeditinginhumanbyTALENtechnologyandobservetheeffectsofjmjd3knockoutontheGrowthinhumancervicalcancercellsinvitro.Methods：ConstructionofTALENvectorforjmjd3geneeditinginhuman(TALENleftarmplasmidL1andTALENrightarmplasmidR1).Thetwoplasmidswereidentifiedbyendonucleaseandthensequen

7、ced.TALENleftarmplasmidL1,TALENrightarmplasmidR1andEGFPfluorescenceplasmidtransfectedtotallytohumancervicalcancercelllineHelawithnormalHelacellsactingasblankcontrolgroup.Theefficiencyoftransfectionisc