基于蛋白质组与代谢组的肉鸡热应激分子机制研究

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1、密级:论文编号:中囯农业科学院学位论文基于蛋白质组与代谢组的肉鸡热应激分子机制研究ProteomicsandMetabolomicsAnalysisontheMolecularMechanismofHeatStressinBroilers博士研究生:唐湘方指导教师:张敏红研宄员张宏福研宄员申请学位类别:农学博士专业:研宄方向:培养单位:北京畜牧兽医研宄所中国农业科学院研究:生院2015年6月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科

2、学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。中国农业科学院博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目基于蛋白质组与代谢组的肉鸡热应激分子机制研究动物营养与研究论文作者唐湘方专业动物营养与环境飼料科学方向张敏红研究员培养单位（

3、研宄所、!指导教师北京畜牧兽医研究所张宏福研究员中心）硕（博）姓名职称单位专业签名导师硕导口评博导口硕导口阅博导口人硕导口博导口答辩硕导口生物化学与分主张荣庆教授清华大学博导■子生物学#Mr席硕导口动物营养与饲谯仕彦教授中国农业大学博导■料科学硕导口中国农业科学动物营养与饲刁其玉研究员博导■院饲料研究所料科学,11V答硕导口动物营养与饲辩袁建敏教授中国农业大学博导■料科学硕导口中国农业科学动物营养与饲委刘国华研究员博导■院饲料研究所料科学V员硕导口农业生物环境施正香教授中国农业大学博导■与能源工程硕导口北京畜牧兽医唐中林研究员动物遗传育种博导■研究所会议记录（秘书）孟庆石论文答辩时间地

4、点2015年5月26日北京畜牧兽医研究所科研楼二楼会议室Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationProteomicsandMetabolomicsAnalysisontheMolecularMechanismofHeatStressinBroilersPh.D.Candidate：XiangfangTangSupervisor：MinhongZhangProfessorHongfuZhangProfessorMajor：AnimalNutritionandFeedScienceSpecialty：Animal

5、NutritionandEnvironmentJune2015摘要热应激是现代肉鸡生产中普遍关注的关键问题，但机体的热应激分子调控机制尚不完全清楚。目前多数研究仅限于个别基因的功能表达或通路分析上。本研究通过构建肉鸡热应激模型，应用蛋白质组学和代谢组学高通量分析技术，在整体水平系统分析肉鸡热应激下体内蛋白质及小分子代谢产物组成的变化及其整体代谢通路，结合生物信息学方法，对肉鸡热应激分子机制进行深入研究。主要内容及结果如下：1、肉鸡热应激模型构建：选择21d健康AA雄性肉鸡144只，随机分成对照组（26±1℃）和持续高温组（32±1℃），每组72只，饲养至42日龄，测定体温、生产性能与血

6、液生化指标。结果表明：在21-42d持续3周高温热暴露分别降低肉鸡的平均日增重60%（P<0.01）和平均日采食量42%(P<0.01)，提高料重比46%（P<0.01）；持续32℃热暴露72h后，肉鸡体温显著升高（P<0.05），血液中TG显著降低（P<0.05），而LDL-C和GLU显著升高（P<0.05）；持续32℃热暴露1周后，肉鸡体温显著升高（P<0.05），血液中AST和LDL-C水平显著升高（P<0.05），GLU和HDL-C增加达到极显著水平（P<0.01）。2、基于质谱的肉鸡肝脏蛋白质组鉴定方法研究：试验开始72h时，在热应激模型试验肉鸡中随机抽取AA雄性肉鸡18只，

7、对照组（26±1℃）和持续高温组（32±1℃）各9只进行屠宰取肝样用于蛋白质组鉴定和SWATH定量分析。结果表明，通过丙酮沉积、延长洗脱时间和质谱“分级”显著提高了鸡肝蛋白质的鉴定数量，实现在165min有效时间内一次鉴定到4271个蛋白及对应的36073条多肽，且50%以上的蛋白有超过5段的多肽被鉴定到，被鉴定到的蛋白分别参与糖类代谢、脂类代谢等328个重要代谢通路，该研究确定了适合鸡肝等复杂样品内的蛋白质鉴定策略。3、非标定量技术解析肉鸡肝