去乙酰化酶sirt1调控卵丘颗粒细胞凋亡对单精子卵胞浆内显微注射助孕的影响

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1、分类号：R392.2学校代码：10392学科专业代码：100102学号：200803043硕士学位论文去乙酰化酶SIRT1调控卵丘颗粒细胞凋亡对单精子卵胞浆内显微注射助孕的影响EffectsofapoptosisofgranulosecellregulatedbySIRT1onintracytoplasmicsperminjection学位类型：医学硕士所在学院：基础医学院申请人姓名：饶冬东学科、专业：免疫学导师：章涛教授林典梁副主任医师研究起止日期：2013年7月至2015年5月答辩委员会主席：王玮教授答辩日期：2015年5月

2、29日二○一五年六月目录附录…………………………………………………………………….1中文摘要……………………………………………………………….2英文摘要……………………………………………………………….3前言…………………………………………………………………….4第一部分论文………………………………………………………….61.材料与方法……………………………………………………….62.实验结果…………………………………………………………113.讨论………………………………………………………………234.小结……………………………

3、…………………………………24第二部分论文…………………………………………………………251.材料与方法………………………………………………………252.实验结果…………………………………………………………343.讨论………………………………………………………………394.小结………………………………………………………………40结论……………………………………………………………………40参考文献………………………………………………………………40综述……………………………………………………………………43致谢…………………………

4、…………………………………………48英文缩略表英文缩写英文全称中文含义IVF-ETinvitrofertilization-embryotransfer体外受精-胚胎移植SIRT1Silentinformationregulator2homolog1去乙酰化酶1FOXOtheforkheadboxOfamily叉头转录因子ARTassistedreproductivetechnology辅助生殖技术ICSIintracytoplasmicsperminjection单精子卵胞浆内注射术Caspasecysteinylaspart

5、atespecificproteinase半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶GSISglucose-stimulatedinsulinsecretion胰岛素分泌UCP2uncouplingprotein2解偶联蛋白2GCgranulosacell颗粒细胞OCCCOoctye-corona-cumuluscomplex卵冠丘复合体1去乙酰化酶SIRT1调控卵丘颗粒细胞凋亡对单精子卵胞浆内注射助孕的影响中文摘要目的：本研究拟对去乙酰化酶SIRT1调控人卵丘颗粒细胞凋亡对单精子卵胞浆内显微注射的影响进行研究，并探讨SIRT1、FOXO3a通路

6、调控颗粒细胞凋亡的机制。方法：采用免疫细胞化学染色、Western-blot法检测人卵丘颗粒细胞SIRT1和FOXO3a蛋白的表达；采用Real-timePCR技术检测SIRT1和FOXO3amRNA的表达；采用流式细胞术检测凋亡蛋白Caspase-3的活化情况，分析颗粒细胞凋亡率；采用化学发光法检测卵泡液各项生化免疫指标。结果：1、人卵丘颗粒细胞SIRT1蛋白表达与颗粒细胞凋亡显著相关（P＜0.05）。2、随着颗粒细胞SIRT1表达增高，颗粒细胞凋亡率随之升高，穿卵泡数、获卵数、ICSI卵子数、受精数、卵裂数、优质胚胎数、囊胚

7、形成数、囊胚冷冻数则随之下降（P＜0.01）。3、人卵丘颗粒细胞SIRT1基因和蛋白的表达与FOXO3a表达显著相关（P＜0.01）。4、卵泡液雌激素E2水平与颗粒细胞SIRT1表达显著相关（P＜0.01）。结论：人卵丘颗粒细胞中SIRT1蛋白表达增加可促进颗粒细胞凋亡，使ICSI助孕过程中的穿卵泡数、获卵数、ICSI卵子数、受精数、卵裂数、优质胚胎数、囊胚形成数、囊胚冷冻数等指标受到影响，从而影响ICSI助孕结局。其作用机制可能是FOXO3a通过调控SIRT1基因转录诱导卵丘颗粒细胞凋亡。关键词：去乙酰化酶1，颗粒细胞，凋亡，

8、单精子卵胞浆内注射，体外受精-胚胎移植，叉头转录因子2EffectsofapoptosisofgranulosecellregulatedbySIRT1onintracytoplasmicsperminjectionAbstractObjective:Topro