匹罗卡品致大鼠癫痫持续状态后海马puma和cytc的表达变化

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1、上海交通大学硕士学位论文匹罗卡品致大鼠癫痫持续状态后海马Puma和CytC的表达变化指导教师：耿直主任医师作者姓名：王新林学科专业：神经病学研究方向：癫痫申请学位：硕士学位答辩日期：2015年05月05日学号：1127259541培养单位上海交通大学附属第六人民医院SHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITYMASTER’STHESISTheexpressionofpumaandcytochromeCinhippocampusafterpilocarpine-inducedstatusep

2、ilepticusTutor:GengZhiName:WangXinLinDecipline:NeurologyNumber:1127259541学位论文原创性声明人在导师的指导下，，是本本人郑重声明：巧呈交的学位论文的内容外，本独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用论文不包含任何其他个人或集体的作品成果。对本已经发表或撰写过确方式标明。文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中Ｗ明本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名；日期；年＾月日

3、学位论文版巧使用巧板书本学位论文作者完全了解学校有关保留规定，、使用学位论文的同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论义被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□。，在年解密后适用本援权书＿本学位论文属于不保密＂＂（请在ｔＵ上方框内打Ｖ）指导教师签名：义学位论文作者签名＾、期：厂月／曰曰曰］伟曰期：＞皆年方月

4、上海交通大学医学院硕士学位论文匹罗卡品致大鼠癫痫持续状态后海马Puma和CytC的表达变化摘要目的：癫痫是一种常见病，流行病学调查显示其发病率为5‰~7‰。癫痫发作不仅可引起脑部神经元的坏死或病理性凋亡及神经生物学改变，而且还常引起患者及家属严重的心理障碍。癫痫持续状态（Statusepilepticus,SE）是神经科临床常见的危急重症，常常导致大脑易损区海马组织的损伤，若得不到及时的缓解和治疗，死亡率很高。研究发现Bcl-2蛋白家族中仅具有BH3结构域的P53上调细胞凋亡调控因子Puma（P5

5、3up-regulatedmodulatorofapoptosis，Puma）蛋白在细胞凋亡途径中发挥了重要的作用。而CytC在线粒体外膜渗透性增加的情况下可以释放出来，参与内源性线粒体凋亡途径。Puma和CytC对SE后海马神经元的损伤机制研究较少，本实验采用匹罗卡品制作SE大鼠动物模型，探讨SE后24小时CytC和Puma在海马组织中的表达情况。方法：成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠62只，随机分成实验组（n=54）和对照组（n=8）。实验组先应用硫酸阿托品以拮抗匹罗卡品的外周

6、胆碱能效应，随后通过匹罗卡品腹腔注射制造癫痫模型，根据大鼠是否发生SE将其分为癫痫持续状态组（SE组）和非癫痫持续状态组（非SE组）。24小时后取大鼠海马组织，HE染色观察海马CA1区神经元的数量，TUNEL染色观察海马神经元的损伤情况。采用Westernblot方法测定海马组织中Puma的表达，免疫组织化学方法检测海马组织中CytC的含量。运用Pearson相关分析法分析Puma和CytC表达的相关性。对照组除匹罗卡品用生理盐水代替外，其余所有操作步骤与实验组相同。结果：54只实验组大鼠中未诱导

7、出SE的有12只，归入非SE组。成功诱导出SE1上海交通大学医学院硕士学位论文的有42只，成功率为77.8%。42只SE大鼠中24h之内死亡14只，死亡率为33.3%，入SE组28只。对照组和非SE组24小时内均未死亡。SE组大鼠海马CA1区HE染色神经元数量（54.75±3.37）与对照组（103.75±2.12）和非SE组（100.67±2.19）相比，显著减少（p<0.05）。SE组TUNEL阳性神经元数目（25.14±2.77）与对照组（3.25±2.19）和非SE组（3.33±2.02）

8、相比明显增加（p<0.05）。而且可见SE组海马组织CytC阳性神经元的含量（14.11±2.38）较对照组（2.88±2.70）和非SE组（4.42±2.19）明显增多（p<0.05）。并可见SE组海马组织Puma蛋白的表达（0.439±0.038）较对照组（0.016±0.003）和非SE组（0.249±0.034）明显增多（p<0.05）。相关性分析显示SE组Puma蛋白的表达和Tunel染色阳性神经元细胞含量之间存在着相关关系（r=0.891,p<0.01）；而且，SE组P