利用体细胞核移植制备肾脏特异性表达cre重组酶的转基因工具猪

《利用体细胞核移植制备肾脏特异性表达cre重组酶的转基因工具猪》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、%Uffli*~Jffiit~f$t1i1tu~'~ID!~~·ti*~Cre£~_§_~8<1#¥~IJ@.~ConstructionofTransgenicMini-pigswithkidneySpecificallyExpressingCrerecombinasefF~~i~:*B~~~~1S~$:±1PJ1-t~~5:1'--T±~i!l~1i}f3i7JIt]:Mlm~~*~i~~tf?-@~jJijj:W~13~I'±=r~1-'---~~11*[]lj:li~t~±:hg:~if!1ft:i}]~i!Jt4~~~2015:q:12jj4BBitY.i'fi'#JA:~¥

2、1#~IJJ.0tA.JJX:.:~±Z~7WJ'r·.1t~fl/:~±~!U{fffr:ftlfl-111:o'rtdt%i[~~]Wf¥_L}(•"f:~I$13Y./i.~11&.f.tifX~.A'"f:o*~*i[~~]WJTf)_>7:~5:~n~Jl!J"1:~1-1&t.tifX~.A:·"f:o'¥#%i[~~]~L~J~"~};':_l:tt.A:"''·PT11*~*i[~~]9='IllN·"f:iSftTiJFJt1::llJL(;

3、A_•'f::fl}~§:t{i:~1-1_l:1=1;f,f_A•"'·7-~K~H~et~r1#;f,f_A•"f:)(rHt:vJ:tet~rx_l:1=1t.t.A:·"'·7-*~£*it3tf'l=~13~-15001~~R,1«5!q~.ff~IJ1*g*it3t-t5W~&*'~~~*~ffffl·fu~~A,~~~~*~~~~$~$~~.@it!fr1f1iiJJf~tc13~~*'J,1'~&,£f1

4、Bf~~JZB~5!~~ffo*A~~~~=m¥~~~~~,~*Aam~~~~m~T,~~tul.:itt1T11JfYiIfi=Ji!fltX11j}-811JX*o~~~cpB~£¥i~'JIffl8{]I*J~5~,*~~~~*ff~~~~A~~~B~~*~m~tt~~~~*o~*~B1~~~~~~~~B1~A~~~,~B~~t=p~~~~~~~o*A3t~~iRfU1Js:~ajjEr~~~f-f~r!L~E8*A71U:Bo中文摘要利用体细胞核移植制备肾脏特异性表达Cre重组酶的转基因工具猪囊性肾脏疾病（PKD）是常染色体显性遗传疾病，在临床中较为常见，对人类健康构成重大威胁

5、。科研人员期望通过动物模型揭示其致病机理。由于人和小鼠肾脏的生理学参数和解剖学特征显著不同，因此基因修饰小鼠模型并不能很好地阐述人类囊性肾脏疾病过程。而猪作为一种动物模型，其器官大小、结构，以及生理学参数更接近人类，尤其适用于研究人类疾病。Cre-loxP重组酶系统是目前比较常用的构建条件性基因敲除动物模型的基因修饰技术。Cre-loxP系统的应用主要依赖于构建时空特异性表达Cre重组酶的转基因动物。利用发育特定时期或特定组织表达Cre重组酶的转基因动物与loxP序列锚定目的基因的转基因动物杂交，其子代能够达到条件性基因敲除的目的。水通道蛋白（Aquaporin）是一个跨膜水分子运输通

6、道蛋白。AQP2(Aquaporin2)属于水通道蛋白家族的一员，主要表达于哺乳动物肾脏组织。本研究利用8000bp大小的猪源AQP2启动子片段驱动Cre表达，构建肾脏表达Cre重组酶的转基因工具猪。首先，分析了中国实验用小型猪不同组织中AQP2表达情况，并利用体外实验检测了所构建AQP2-Cre表达载体的表达活性。结果显示，8000bp猪源AQP2启动子区序列能够驱动Cre重组酶在LLC-PK1细胞中高效表达。利用所构建AQP2-Cre表达载体转染中国实验用小型猪胎儿成纤维细胞，通过G418选择性培养基筛选12天，获得细胞克隆。PCR法鉴定细胞克隆后，利用体细胞核移植技术制备转基因克

7、隆猪。分析结果表明，健康出生的2头猪均为阳性AQP2-Cre转基因小型猪。通过RT-PCR和WesternBlotting证明转基因小型猪的肾脏组织中表达Cre重组酶，而在其他检测组织中不表达。免疫组织化学结果证表明，转基因小型猪的肾脏集合管细胞中表达Cre重组酶，而对照组正常小型猪没有Cre重组酶表达。结果证明，本实验成功制备了肾脏组织表达Cre重组酶的转基因小型猪。在CreI重组酶表达分析的基础上，我们进一步分离了AQP2-Cre转基因小型