人巨细胞病毒pul38激活mtorc1的机制研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITYIT匕论文题目人巨细胞病毒pUL38激活mTORC1的机制研究白亚丹研究生姓名钱志康刘海燕指导教师姓名免疫学专业名称抱疹病毒分子生物学研究方向2015年4月论文提交日期苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不含其它个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：日期：年夂月_1日苏州大学学位论文使用授

2、权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，艮口：学位论文著作权归苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档,允许论文被查阅和借阅，可以釆用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口.本学位论文属在年月解密后适用于本规定。非涉密论文x/论文作者签名：1具日期人巨细胞病毒pUL38激活mTORC1的机制研究中文摘要中文摘要人巨细

3、胞病毒是β型疱疹病毒家族中的成员，能感染多种不同的细胞类型。人巨细胞病毒的感染是导致新生儿出生缺陷的主要原因之一，此外它能在免疫缺陷的人中引起严重的疾病。这种病毒一旦感染了宿主之后，就不能被宿主的免疫系统彻底清除，之后它将以一种潜伏感染的形式终生存在，并且在宿主体内反复感染发作。作为细胞专噬性病毒，人巨细胞病毒已经进化出了多种机制在宿主细胞内创造一种有利于自身生存和复制的环境。由于mTORC1在调控细胞内蛋白合成及同化代谢等方面都起着非常重要的作用，因此它常常成为病毒调控的作用靶标。许多病毒都已进化出了多种多样的机制或通过直接作用于mTORC1或间接作用于mTORC1的上下游分子来激活细

4、胞内mTORC1这条重要的信号通路。尽管人巨细胞病毒在感染之后会引起细胞内环境的压力，但是它依然能维持高活性的mTORC1水平。已有研究报道人巨细胞病毒中的多功能蛋白pUL38能通过结合并拮抗TSC2来激活mTORC1，pUL38也能抑制在巨细胞病毒感染过程中由内质网压力所诱导的细胞凋亡。本研究中我们揭示了pUL38的N端截短突变体pUL3825-331在抑制细胞凋亡方面具有完整的功能。然而有趣的是pUL3825-331虽然失去了结合TSC2的能力但它却依然能够激活mTORC1，尽管和全长的pUL38相比稍微弱了一点。表达pHA-UL3825-331的重组病毒产生病毒的能力和野生型病毒相

5、比大约降低了10倍，这表明pUL38和TSC2的相互作用在产生有效病毒方面的重要性。通过利用点突变分析的方法我们确认了pUL38中位于第23和24位的氨基酸基序TQ对于其和TSC2的相互作用是极其重要的。更重要的是，当过表达突变体pHA-UL38TQ/AA时，它能够像pHA-UL3825-331一样激活mTORC1。通过利用CRISPR基因编辑技术我们构建了TSC2敲除的U373-MG单克隆细胞系，并且揭示了pUL38在TSC2敲除的细胞中能够更进一步地激活mTORC1。因此本研究确定了pUL38中对pUL38和TSC2相互作用来说所重要的TQ氨基酸基序，并且阐明了pUL38能通过TSC

6、2依赖和不依赖2种方式激活mTORC1。关键词：人巨细胞病毒，pUL38，mTORC1，TSC2作者：白亚丹指导老师：钱志康刘海燕I英文摘要人巨细胞病毒pUL38激活mTORC1的机制研究AmechanisticstudyofhumancytomegaloviruspUL38activatingmTORC1AbstractHumancytomegalovirus(HCMV)isamemberofthebetaherpesvirusfamilywithbroadcelltropism.HCMVinfectionisaleadingcauseofbirthdefectsandcausesse

7、verediseasesinimmunocompromisedindividuals.Followingprimaryinfection,HCMVisunabletobeclearedbythehostimmunesystem,andpersistsasalifelonglatentandrecurrentinfectioninthehost.Asanobligatecellularpathogen,HCMVhasevolvedmu