亚低温对颅脑创伤后受体相互作用蛋白激酶-1及其坏死性凋亡通路表达影响的实验研究

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1、分类号：R651.1学校代码：10062密级：学号：2012602631硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：亚低温对颅脑创伤后受体相互作用蛋白激酶-1及其坏死性凋亡通路表达影响的实验研究TITLEEffectofMildHypothermiaTreatmentonRatRIPK-1ExpressionandAnalysisofRIPK-1SignalingPathwaysAlteredFollowingTraumaticBrainInjury一级学科：临床医学二级学科：外科学神经外科

2、论文作者：张海博指导教师：张赛教授天津医科大学研究生院二零一五年五月分类号：R651.1学校代码：10062密级：学号：2012602631学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：亚低温对颅脑创伤后受体相互作用蛋白激酶-1及其坏死性凋亡通路表达影响的实验研究TITLEEffectofMildHypothermiaTreatmentonRatRIPK-1ExpressionandAnalysisofRIPK-1SignalingPathwaysA

3、lteredFollowingTraumaticBrainInjury一级学科：临床医学二级学科：外科学神经外科论文作者：张海博指导教师：张赛教授导师组成员：涂悦教授程世翔讲师天津医科大学研究生院二零一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：张海博

4、日期：2015年5月22日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：张海博日期：2015年5月22日导师签名：张赛日期：2015年5月22日天津医科大学硕士学位论文中文摘要研究目的：本实验利用可控性

5、皮质损伤装置（CCI）装置成功建立大鼠颅脑创伤模型，及可控性细胞损伤装置（CIC-II）装置成功建立颅脑创伤的细胞模型并运用此模型进行：(1)探讨亚低温对颅脑创伤（TBI）后大鼠脑组织受体相互作用蛋白激酶-1（RIPK-1）表达的影响。（2）对RIPK-1介导的坏死性凋亡通路中神经细胞坏死性凋亡的分子机制进行探索并揭示重要蛋白在通路中的相互作用。（3）研究亚低温对坏死性凋亡通路保护作用的分子机制。（4）FADD在RIPK-1介导的坏死性凋亡通路中的作用。研究内容与方法：本实验分为两个部分：即动物实验部分和细胞

6、实验部分。实验一：利用可控性皮质损伤装置（CCI）建立大鼠颅脑创伤模型并给予多种方法系统评价造模准确性。实验二：应用可控性细胞损伤装置（CIC-II）装置成功建立颅脑创伤的细胞模型并就细胞形态学等特征进行系统评价研究。实验一：健康成年Wistar大鼠40只，将其随机分成4组：Sham组（假手术）开骨窗不予打击、伤后不给予亚低温治疗，Sham+HT组（假手术+亚低温）开骨窗不予打击而后亚低温干预8小时，TBI组（手术）开骨窗后应用CCI装置打击致伤，参数设置为：速率（v）4m/s，深度（d）2mm，持续时间（t

7、）120ms，TBI+HT组（手术+亚低温）开骨窗，CCI打击致伤（前后打击参数保持一致），伤后采取亚低温治疗时间统一定为8小时，待动物苏醒后，在伤后1天和2天进行神经功能缺陷综合评分（n=10），后进行亲神经特殊染料（甲苯胺蓝）的脑组织染色实验；Western-blot测定大鼠皮层RIPK-1,RIPK-3,FADD,PARP-1,Caspase-3,Caspase-8,TNF-α,TRAIL,andFasL的表达；Real-timePCR测定大鼠皮层RIPK-1,RIPK-3,FADD,PARP-1,Ca

8、spase-3,Caspase-8,TNF-α,TRAIL,andFasL的mRNA表达；脑组织HE染色、免疫组化染色；脑组织DNA免疫荧光实验；透射电子显微镜检测脑组织坏死后亚细胞结构变化；Fluoro-Jade.C(FJC)脑组织染色；大鼠脑组织血流量测定。实验二：SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞的培养，应用CIC-II梯度打击SH-SY5Y并评价，常规培养胰酶消化SH-SY5Y细胞，准备生物硅