三角帆蚌肽聚糖识別蛋白s和l基因cdna全长克隆及组织表达分析

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1、分类号：___________________密级：__________________学校代码：10414学号：2012010707_琢师忽犬学Of*,1#40xj'Y.'.,f硕士研究生学位论文*一*/^.i**'r~''"■'•»'»-a.''_..*JJ；►fv,v''-三角帆蚌肽聚糖识别蛋白S和L基因cDNA全长克隆及组织表达分析MolecularcloningandexpressionanalysisofafulllengthcDNApeptidoglycanrecognitionp

2、roteinSandLinHyriopsiscumingii张建强痛4/參錢院所：生命科学学院导师姓名：刘毅学科专业：生物化学与分子生物学研究方向：分子免疫学二〇一五年六月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：

3、签字日期：年月日摘要模式识别受体(Patternrecognitionreceptors,PRRs)是识别微生物表面病原体相关分子模式(Pathogen-associatedmolecularpatterns,PAMPs)的一类先天免疫分子，肽聚糖识别蛋白(Peptidoglycanrecognitionproteins,PGRPs)家族是PRRs一员可识别细菌肽聚糖(Peptidoglycan,PGN)。PGRPs在无脊椎动物和脊椎动物中高度保守，如软体动物。本研究采用5′、3′RACE技术，

4、对高通量转录组测序所得三角帆蚌(Hyriopsiscumingii)PGRP-S(hcPGRP-S)和PGRP-L(hcPGRP-L)基因部分片段分别进行了5′、3′末端克隆，经拼接得到hcPGRP-S和hcPGRP-LcDNA序列全长，并采用实时荧光相对定量(qRT-PCR)技术检测了其组织表达分布，及经肽聚糖和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激后在肝胰腺中的表达变化。hcPGRP-S基因cDNA全长1438bp，开放阅读框长858bp，编码285氨基酸(aa)，预测分

5、子量大小为32.3ku，理论等点为7.98，无信号肽和跨膜结构。与其他物种PGRPs氨基酸序列多重比对发现，hcPGRP-S氨基酸序列与夏威夷短尾鱿鱼PGRP4同源性最高(51%)，而与牛PGLYRP3同源性最低(33%)。qRT-PCR检测结果表明，hcPGRP-S在性腺、肝胰腺、鳃、心脏及外套膜均有表达，性腺中表达水平最高。经PGN或LPS注射刺激后，肝胰腺中hcPGRP-S表达水平显著上调，表明hcPGRP-S可能在三角帆蚌的肝胰腺抗菌免疫反应中发挥重要作用。hcPGRP-L基因cDNA序

6、列全长1716bp，开放阅读框长1263bp，编码420aa，预测蛋白分子量大小为48.24ku，理论等电点为8.58，预测有4个潜在N-糖基化位点，分别为N67QT、N99KS、N193LT和N229SS，有PGRP结构域(aa249-391)，hcPGRP-L无信号肽和跨膜螺旋结构。氨基酸序列多重比对发现，hcPGRP-L氨基酸序列与三角帆蚌PGRP-1a、PGRP-S、PGRP-S1和PGRP-S2同一性分别为57%、62%、53%和56%。hcPGRP-L在性腺、肝胰腺、鳃、心脏及外套膜

7、均有表达，而在性腺中表达最高。经PGN注射刺激后，肝胰腺中hcPGRP-L表达水平显著上调，而LPS刺激后hcPGRP-L表达水平无显著变化。关键词：三角帆蚌；PGRP-S；PGRP-L；克隆；表达IAbstractPatternrecognitionreceptors(PRRs)areinnateimmunemoleculesthatrecognizepathogen-associatedmolecularpatterns(PAMPs)presentedonmicrobialpathogens

8、.Peptidoglycanrecognitionproteins(PGRPs)areafamilyofPRRthatrecognizebacterialpeptidoglycan.PGRPsarehighlyconservedininvertebratesandvertebratesincludingMolluscs.Inthisstudy,thecDNAsequenceofHyriopsiscumingiiPGRP-S(hcPGRP-S)andPGRP-L(hcPGRP-L)wasclone