ⅰ组mglur在氟砷联合染毒致海马神经元突触可塑性损伤中的调控作用

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1、中图分类号：R12论文编号：HBLG2015-017UDC：密级：公开硕士学位论文Ⅰ组mGluR在氟砷联合染毒致海马神经元突触可塑性损伤中的调控作用作者姓名：曾洋学科名称：公共卫生与预防医学研究方向：劳动卫生与环境卫生学学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年4月21日申请学位类别：医学硕士导师姓名：蒋守芳教授单位：华北理工大学公共卫生学院佟俊旺副教授单位：华北理工大学公共卫生学院论文评阅人：单位：单位：论文答辩日期：2015年6月8日答辩委员会主席：钱令嘉研究员关键词：氟；砷；氟砷联合染毒；突

2、触可塑性；代谢型谷氨酸受体；学习记忆唐山华北理工大学2015年6月RegulatoryroleofIgroupmGluRonHippocampalNeuronsSynapticPlasticityDamageinducedbyFluorideandArseniccombinedExposureDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegr

3、eeofMasterofMedicinebyZengYang(PublicHealthandPreventiveMedicine)Supervisor:ProfessorJiangShoufangJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做

4、了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：2015年06月10日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自2015年06月10日起。作者签名：导师签名：签字日期：2015年6月11日签字日期：2015年6月11日摘要摘要目的本

5、研究探讨氟砷联合染毒对原代培养海马神经元生长、突触可塑性的影响，从Ⅰ组代谢型谷氨酸受体蛋白表达水平探讨氟砷联合暴露损害学习记忆的分子机制，为地方性氟砷联合中毒的防治提供理论依据。方法1原代培养的新生SD大鼠海马神经元分别暴露于0.00、0.10、0.20、0.40、0.80μg/ml氟化钠和0.00、0.05、0.10、0.20、0.40μg/ml亚砷酸钠，染毒24h。采用倒置显微镜和扫描电镜观察海马神经元形态变化，CCK8检测试剂盒检测细胞活性，LDH检测试剂盒检测细胞培养上清液中的乳酸脱氢酶（lactate

6、dehydrtogenase，LDH）活力，AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率，Western-blot方法检测海马神经元中SYN和GAP-43蛋白的表达水平。2原代培养的新生SD大鼠海马神经元在氟砷联合染毒（0.40μg/ml氟化钠+0.10μg/ml亚砷酸钠）的同时分别给予三种谷氨酸受体抑制剂D-AP5（NMDAR抑制剂）、LY367385（mGluR1抑制剂）、MPEP（mGluR5抑制剂）进行干预，作用24h。采用CCK8检测试剂盒检测细胞活性，Western-blot方法检测海马神

7、经元中NR2B、mGluR1α、mGluR5及突触相关蛋白SYN、GAP-43的蛋白表达水平。结果1氟染毒组和砷染毒组大鼠原代培养海马神经元的细胞存活率、神经网络丰富型神经元的构成比随着氟化钠和亚砷酸钠染毒浓度的增加而逐渐降低。2氟染毒组和砷染毒组大鼠原代培养海马神经元的细胞凋亡率、细胞培养上清液中的LDH活力随着氟化钠和亚砷酸钠染毒浓度的增加而逐渐升高。3氟染毒组大鼠原代培养海马神经元中SYN蛋白的表达水平随着氟化钠染毒浓度的增加先升高后降低；而GAP-43蛋白的表达水平随着氟化钠染毒浓度的增加逐渐降低。4砷

8、染毒组大鼠原代培养海马神经元中SYN和GAP-43蛋白的表达水平随着亚砷酸钠染毒浓度的增加而逐渐降低。5与空白对照组比较，氟砷联合染毒组和不同浓度的三种谷氨酸受体抑制剂组（D-AP5组、LY367385组、MPEP组）大鼠原代培养海马神经元的细胞存活率和相应谷氨酸受体蛋白（NR2B、mGluR1α、mGluR5）的表达水平均显著下降（P＜0.05）；与氟砷联合染毒组比较，不同浓度的三种