sirt1调控内质网应激在心肾综合征病理生理过程中作用机制的研究

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1、上海交通大学学位论文Sirt1调控内质网应激在心肾综合征病理生理过程中作用机制的研究作者：黄冬导师：魏盟学号：0127259331答辩日期：2015年5月2上海交通大学医学院2012级博士学位论文Sirt1调控内质网应激在心肾综合征病理生理过程中作用机制的研究摘要研究目的：研究Sirt1在双肾次全切除术（SubtotalNephrectomy，STNx）联合前降支结扎致心肌梗死（Myocardialinfarction,MI）法建立的慢性心肾综合征小鼠模型中对心、肾结构、功能的影响及其参与调控的内质网应激机制。研究内容：本研究将主要研究（1）通过双肾次全切

2、除术建立单纯肾脏病变模型（STNx）观察单纯肾脏病变对心脏结构和功能的影响；（2）与正常肾脏结构功能（ShamSTNx）相比较，伴有肾脏病变时心肌梗死后心肌重构及病理生理出现的变化；（3）心脏特异性Sirt1敲除（Sirt1CKO）后是否加重肾脏病变对心肌梗死后心脏结构、功能的影响以及心肌重构的进一步加重；（4）进一步探讨心脏特异性Sirt1过表达（TgSirt1）对伴有或不伴有肾脏病变时心肌梗死后心肌重构是否具有保护作用。研究方法：我们以C57BL/6小鼠为研究对象，采用双肾次全切除术联合前降支结扎法建立慢性心肾综合征动物模型。首先研究单纯肾脏病变对心脏

3、结构和功能的影响，并与正常肾脏结构功能组相比较，观察伴有肾脏病变时心肌梗死后心肌重构及病理生理出现的变化。本部分实验方案如下：Protocol1：（1）对照组（Control）：WTShamSTNx+ShamMI，即为假双肾次全切除术和假冠脉结扎术的野生型小鼠；（2）WTMI组：WTShamSTNx+MI，即仅给予假双肾次全切除术和冠脉结扎的野生型小鼠；（3）WTMI+STNx组，野生型小鼠先后给予STNx和MI。接下来我们对小鼠实施心脏Sirt1条件性基因敲除（Sirt1CKO），观察心脏特异性Sirt1敲除后是否加重肾脏病变对心肌梗死后心脏结构、功能的

4、影响以及心肌重构的进一步加重。本部分实验方案如下：+/-+/+Protocol2：（1）对照组（CreSirt1ShamSTNx+ShamMI），对照组小鼠先后行假双肾次全切除和假心梗术；（2）对照组单纯心肌梗死组+/-+/+（CreSirt1ShamSTNx+MI），对照组小鼠行假肾次全切除和心梗术；（3）1上海交通大学医学院2012级博士学位论文Sirt1调控内质网应激在心肾综合征病理生理过程中作用机制的研究+/-+/+对照组双肾次全切除术联合心肌梗死组（CreSirt1STNx+MI），对照组小鼠先后行双肾次全切除术和心梗术；（4）单纯Sirt1敲除

5、组（Sirt1CKOShamSTNx+ShamMI），心脏特异性Sirt1敲除小鼠先后行假肾次全切除术和假心梗术；（5）Sirt1敲除单纯心肌梗死组（Sirt1CKOShamSTNx+MI），心脏特异性Sirt1敲除小鼠行假双肾次全切除术和心梗术；（6）Sirt1敲除双肾次全切除术及心肌梗死组（Sirt1CKOSTNx+MI），心脏特异性Sirt1敲除小鼠先后行双肾次全切除术和心梗术。最后，我们对小鼠心肌组织采用微注射Sirt1慢病毒的方法建立心脏特异性过表达（TgSirt1）动物模型，观察对伴有或不伴有肾脏病变时心肌梗死后心肌重构是否具有保护作用。本部分

6、采实验方案如下：Protocol3：（1）对照组心肌内微注射空载病毒（NTgSirt1ShamSTNx+ShamMI），对照组小鼠先后行假双肾次全切除术和假心梗术；（2）对照组单纯心肌梗死组（NTgSirt1ShamSTNx+MI），对照组小鼠先后行假双肾次全切除术和心梗术；（3）对照组双肾次全切除术联合心肌梗死组（NTgSirt1STNx+MI），对照组小鼠先后行双肾次全切除术和心梗术；（4）单纯Sirt1过表达组（TgSirt1ShamSTNx+ShamMI），心脏特异性Sirt1慢病毒微注射小鼠先后行假双肾次全切除术和假心梗术；（5）Sirt1过表达

7、单纯心肌梗死组（TgSirt1ShamSTNx+MI），心脏特异性Sirt1过表达小鼠先后行假双肾次全切除术和心梗术；（6）Sirt1过表达双肾次全切除术联合心肌梗死组（TgSirt1STNx+MI），心脏特异性Sirt1过表达小鼠先后行双肾次全切除术和心梗术。以上动物按照分组分别进行相应手术前后观察，术前及术后收集24h尿液，术后8周分别评估心、肾功能水平。最后我们分别采用ELISA法检测小鼠血液BUN、Scr、BNP、尿液蛋白肌酐比值（UACR），采用Westernblot检测心、肾组织中内质网应激（Endoplasmicreticulumstress

8、，ERS）相关蛋白的表达，以探讨Sirt1在参与本慢性心肾综合征疾