pd-1对小鼠体内免疫反应的调节在动脉粥样硬化形成中的作用

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1、分类号：R541.4学校代码：10062密级：学号：2012602652硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：PD-1对小鼠体内免疫反应的调节在动脉粥样硬化形成中的作用TITLETheroleofthePD-1pathwayregulatedimmuneresponsesinatherosclerosisinmice一级学科：临床医学二级学科：全科医学论文作者：马婷婷指导教师：诸葛欣天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R541.4学校代码：10062密级：学号：2012602652学位类别：

2、科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：PD-1对小鼠体内免疫反应的调节在动脉粥样硬化形成中的作用TITLETheroleofthePD-1pathwayregulatedimmuneresponsesinatherosclerosisinmice一级学科：临床医学二级学科：全科医学论文作者：马婷婷指导教师：诸葛欣导师组成员：肖广辉天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文

3、中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相

4、对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：目前，动脉粥样硬化在我国的患病率和发病率呈显著上升趋势，并已成为我国老年人的主要病死原因之一。最近的研究表明，炎症及免疫反应在动脉粥样硬化的发生发展中起着重要作用。免疫细胞，特别是炎性细胞的浸润、激活及增殖在易损性动脉粥样硬化斑块的形成和进展中发挥着极为重要的作用。细胞程序性死亡受体1（PD-1）是近年来新发现的一种介导免疫抑制信号的共刺激分子受体，在激活的T细胞、B细胞和一些髓样细胞上表达。近年来，人们发现P

5、D-1/PD-Ls路径与急慢性炎症、肿瘤、免疫耐受、自身免疫性疾病等密切相关。因为动脉粥样硬化的发生发展与免疫及炎症反应有着密切的联系，所以PD-1及其通路可能对动脉粥样硬化的发生发展发挥了重要调控作用。因此本研究旨在利用PD-1和ApoE双基因缺陷小鼠，来研究PD-1信号通路在动脉粥样硬化发展中的作用。方法：将PD-1-/-小鼠和ApoE-/-小鼠进行交配，获得PD-1-/-ApoE-/-双基因敲除小鼠。以同龄野生型PD-1+/+ApoE-/-小鼠作为对照组，分别测定6周时小鼠体重、血清三酰甘油、总胆固醇和高密度脂蛋白

6、胆固醇的基线水平。两组小鼠在高脂喂养12周后，再次检测其体重、血清三酰甘油、总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的水平。小鼠麻醉后，打开胸腔，用注射器穿刺左心室，用冷磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗左心腔和主动脉腔内的残余血液。自升主动脉处分离心脏与主动脉，并切除心脏下半部分，心脏上半部分用冷PBS冲洗残血后，包埋于OCT。钝性分离自主动脉弓至腹主动脉分叉处的主动脉节段，用冷PBS冲洗残血后，取标本进行分析。用油红染色法观察标本动脉粥样硬化情况。同时，利用免疫组化方法分析斑块内CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、巨噬细胞和

7、平滑肌细胞数量或比例变化。利用流式细胞仪检测脾细胞总数、CD4+T细胞、CD8+T细胞及细胞表面CD26L、CD25的表达水平。利用细胞纯化柱纯化CD4+和CD8+T细胞用CFSE标记，从正常小鼠分离树突状细胞和巨噬细胞，经LDL处理后，按不同比例与CD4+和CD8+T细胞混合，经FACS检测确定CD4+和CD8+T细胞的增殖情况。将纯化后的CD4+和CD8+T细胞经抗CD3抗体激活，用酶联免疫吸附法检测上清中IL-2、IFN-γ、TNF-α的含量。同时，用酶联免疫吸附法检测高脂喂养12周后小鼠空腹血清中IL-2、IFN

8、-γ、TNF-α的水平。结果：6周基线和高脂喂养12周末，实验组和对照组小鼠的体重、血清三酰甘I天津医科大学硕士学位论文油、总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇水平均无显著性差异；高脂喂养12周后，PD-1-/-ApoE-/-小鼠主动脉弓和降主动脉内膜内动脉粥样硬化斑块较对照组显著增多，管腔严重狭窄，主动脉根部切片显示动脉粥