ninj2影响动脉粥样硬化形成的分子机制研究

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1、分类号学号M201271544学校代码10487密级硕士学位论文NINJ2影响动脉粥样硬化形成的分子机制研究学位申请人：陈晶学科专业：遗传学指导教师：王擎教授答辩日期：2015年5月19日AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofscienceAnalysisofMolecularMechanismsbywhichNINJ2CausesAtherosclerosisCandidate：Jin

2、gChenMajor：GeneticsSupervisor：Prof.QingWangHuazhongUniversityofScienceandTechnologyWuhan,Hubei430074,P.R.ChinaMay,2015独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法

3、律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打―√‖）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日华中科技大学硕士学位论文

4、摘要动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是一种常见的心血管疾病，由遗传、环境及两者相互作用引起，主要包括冠心病（CAD）、脑卒中（stroke）等。全球每年死于动脉粥样硬化引起的心血管疾病患者占总死亡人数的29%。自2007年以来，多项全基因组关联分析（GWAS）研究揭示了与AS相关的易感位点和易感基因，但是其遗传和分子机制尚不明确，2009年通过一项对四个前瞻性群体的全基因组关联分析发现了与脑卒中显著相关的基因NINJ2，位于染色体12p13，但是目前对NINJ2基因功能相关研究

5、很少，尤其是在具体AS相关生理病理过程中的影响。因此，本论文主要从细胞、蛋白、分子水平，研究NINJ2基因影响AS形成的分子机制。在本研究中，我们通过蛋白结构预测软件及细胞亚定位实验确定了NINJ2编码蛋白Ninjurin2是定位在细胞膜上的二次跨膜蛋白。为了检测Ninjurin2蛋白在细胞粘附中的作用，在细胞粘附实验中，用siRNA敲低HUVEC细胞中NINJ2的表达，结果显示THP-1细胞对于HUVEC细胞的粘附显著降低，说明Ninjurin2作为一个粘附分子参与了单核细胞对内皮的粘附。为了研

6、究NINJ2与AS相关基因的调控关系，实验中用干扰NINJ2基因表达的HUVEC细胞进行了动脉粥样硬化抗体芯片和趋化因子抗体芯片表达分析，分析得出的结果用实时定量PCR验证，发现敲低NINJ2表达导致细胞中CCL19、CCL20、CCL25、CCL28、BLC、RANTES、TLR4-1、GCSF、IL-6、TNF-α、ICAM-1表达量显著下调，这些基因编码的趋化因子、粘附分子在炎症反应中对白细胞的募集、迁移和粘附起到了重要作用，这进一步说明NINJ2通过调控与白细胞粘附相关的基因参与到AS形成

7、的炎症反应过程中。为了进一步研究Ninjurin2蛋白是否存相互作用蛋白，我们利用Pull-down技术在细胞中寻找与Ninjurin2蛋白相互作用的受体靶蛋白，但结果并未找到相互作用蛋白，具体的靶点作用蛋白仍然有待进一步研究。综上，本研究通过对NINJ2基因功能研究，发现Ninjurin2作为一个粘附分子，在影响单核细胞对内皮细胞粘附效应的同时，还调控多个与白细胞粘附相关的基因，I华中科技大学硕士学位论文由此，我们明确了NINJ2基因通过调控白细细胞粘附血管内皮的过程影响炎症反应进程，参与了AS

8、的形成。关键词：动脉粥样硬化；NINJ2；白细胞；粘附；炎症反应II华中科技大学硕士学位论文AbstractAtherosclerosisistheprimarycauseofcardiovasculardiseasessuchascoronaryarterydisease(CAD)andstroke,bothofwhicharetheleadingcausesofabout29%ofalldeathsperyearworldwide.ManyASsusceptibilityloc