乳酸杆菌对apoe--小鼠动脉粥样硬化形成的影响及机制研究

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1、UDC610博士学位论文学校代码10533密级公开乳酸杆菌对ApoE乒小鼠动脉粥样硬化形成的影响及机制研究StudyOilSuppressedEffectofLactobacillusonAtherosclerosisinApoE。矗MiceandItsmechanisms作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：陈丽华临床医学临床检验诊断学湘雅医院刘文恩教授论文答辩日期边!主：茎：兰f答辩委员会主席，1中南大学二0一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的

2、研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：酪叠季日期：垄!垄年j二-月—望日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩

3、印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：越哞导师签名毕日期．世年羔月字日乳酸杆菌对ApoE乒小鼠动脉粥样硬化形成的影响及机制研究摘要：研究背景：心血管疾病是世界范围内致病率和致死率主要的原因，动脉粥样硬化是心血管病的病理基础。降脂治疗是防治心血管疾病的一种常规手段，常用的降脂药由于是化学合成的药物，各有其副作用和不良反应，临床上迫切需要疗效更好更安全的降胆固醇药。乳酸杆菌从公元3世纪起即被人们用

4、于发酵食物，悠久的使用历史证明了乳酸杆菌是一种安全的益生菌并具有多种功效。从20世纪六七十年代起人们开始关注乳酸杆菌的降胆固醇作用并迅速成为益生菌研究领域的热点。然而，乳酸杆菌降胆固醇的效果一直存在争议，有关乳酸杆菌对心血管疾病作用的研究非常有限，而直接研究乳酸杆菌对动脉粥样硬化形成影响的报道更加少。目的：研究嗜酸乳酸杆菌ATCC4356对ApoE4小鼠血清胆固醇和动脉粥样硬化形成的影响并从乳酸杆菌对炎症、氧化应激和肠道菌群的调节三方面阐明可能的机制。方法：(1)实验对象分组和饲养：野生型C57BL

5、／6J小鼠灌胃生理盐水作为正常对照组(WT组)；选取ApoE斗小鼠为动脉粥样硬化动物模型，ApoE。小鼠灌胃生理盐水作为动脉粥样硬化模型对照组(Vehicle组)；ApoE。小鼠灌胃5x107CFU嗜酸乳酸杆菌ATCC4356作为菌液低剂量组(La．L组)；ApoE乒小鼠灌胃5×108CFU嗜酸乳酸杆菌ATCC4356组作为菌液高剂量组(La．H组)。小鼠均为8周龄的雄性小鼠，每天灌胃体积为0．5mL，连续12TT周。WT组小鼠饲料为普通饲料，ApoE斗小鼠用高脂高胆固醇饲料(含15％猪油+O．25

6、％胆固醇)喂养以加速动脉粥样硬化模型的形成。(2)实验过程中，定期记录小鼠体重并观察体重变化，实验结束后将小鼠麻醉处死、取材、保存。(3)检测乳酸杆菌对血清胆固醇的影响：利用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(totalcholesterol，TC)、甘油三酯(tryglyeride，TG)、高密度脂蛋白胆固醇(highdensitylipoproteincholesterol，HDL．C)和低密度脂蛋白胆固醇(10wdensitylipoproteincholesterol，HDL—C)的水平。(4

7、)检测小鼠主动脉粥样硬化形成情况：对小鼠主动脉大体和主动脉根部冰冻切片行油红O染色，对动脉粥样斑块面积进行定量；对主动脉根部切片进行H&E染色观察粥样斑块的病理变化。(5)检测氧化应激分子的变化：用酶联免疫吸附试验(enzyme．1inkedimmunosorbentassay,ELISA)检测各组小鼠血清中氧化型低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein，OX-LDL)的水平，用生化检测试剂盒检Nd,鼠血清和肝脏中丙二醛(Malondialdehyde，MDA)、超氧

8、化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)和谷胱甘肽(Glutathione，GSH)的水平。(6)检测炎症因子的变化：采用ELISA方法检测小鼠血清肿瘤坏死因子一0【(Tumornecrosisfactoralpha，TNF—Cc)和白介素一10(Interleukin10，IL．10)的蛋白水平；采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real—timepolymerasechainreaction。real—timePCR)检测各组小鼠主动脉的TNF．