microrna-126对ins-1细胞功能的调控作用

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1、分类号：R3单位代码：10752密级：公开学号：20120038宁夏医科大学硕士研究生学位论文MicroRNA-126对INS-1细胞功能的调控作用TheroleofmicroRNA-126inregulationofINS-1cellsfunction学位申请人：张荣华指导教师：袁文俊教授申请学位门类级别：理学专业名称：生理学研究方向：心血管生理学所在学院：基础医学院论文完成日期：二○一五年四月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeTheroleofmic

2、roRNA-126inregulationofINS-1cellsfunctionStudent’sName:ZhangRonghuaSupervisor:YuanWenjunprofessorSubjectCategory:ScienceMajor:PhysiologySpecialty:CardiovascularPhysiologySchool:BasicMedicalCollegeCompletionDate:Apr.2015宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造

3、行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊

4、登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士学位论文中文摘要MicroRNA-126对INS-1细胞功能的调控作用摘要研究背景糖尿病（diabetesmellitus，DM）是一种常见的内分泌代谢性疾病。其基本病理特点为胰岛素分泌绝对或相对不足，或外周组织对胰岛素不敏感，以糖代谢紊乱为主，包括脂肪、蛋白质代谢紊乱的一种全身性疾病。糖尿病的患病率在全球逐年增长。据世界卫生组织WHO估计,至2030年,全球糖尿病患病人数将达3亿。据估计，中国现有成人糖尿病患者9240万，已成为

5、世界糖尿病人数最多的国家。在糖尿病患者中90%以上是Ⅱ型糖尿病，严重影响人们的健康。糖尿病发病机理较为复杂，而胰岛素抵抗在Ⅱ型糖尿病的发生过程中扮演重要角色，但胰岛素抵抗的机制尚不明确。胰岛素是一种蛋白质类激素，由体内胰岛β细胞分泌，体内唯一降血糖激素。胰岛素信号通路涉及多个环节，其中钙离子浓度的变化对胰岛素的分泌有重要影响。有文献报道，在胰岛素信号通路中存在着microRNA(miRNA,miR)-126的作用靶点，且本实验室前期工作证实胰岛素受体底物1（IRS-1）也是其作用靶点。但是miR-126是否影响胰岛β细胞合成和释放胰岛素尚不明确。本课题利用胰

6、岛瘤B细胞（INS-1）模型，研究miR-126对INS-1细胞电压敏感钙通道电流、钙离子浓度及胰岛素分泌量的影响。实验方法1.铺种INS-1细胞，24h后转染40nM的不同miRNA,转染时间为48h，人工合成胰岛素100nM刺激细胞12h。荧光定量PCR检测INS-1细胞中miR-126基因的表达水平。2.激光共聚焦技术检测INS-1细胞内钙离子浓度变化，分组：①阴性对照组（NC）组，转染nonsensestrand；②miR-126过表达（miR-126m）组，转染miR-126mimic；③miR-126低表达（miR-126i）组，转染miR-12

7、6inhibitor；④阳性对照（miR-375m）组，转染miR-375mimic。Ⅰ宁夏医科大学硕士学位论文中文摘要3.穿孔膜片钳技术检测INS-1细胞膜上电压敏感钙通道电流，分组：阴性对照（NC）组和miR-126m组。4.Elisa实验和流式细胞仪，分别检测INS-1细胞胰岛素分泌量及线粒体膜电位变化，分组：阴性对照（NC）组，miR-126m组，miR-126i组，阳性对照（miR-375m）组。实验结果1.荧光定量PCR结果显示：与NC组基因miR-126（107.26±37.88，n=4）的表达量相比，miR-126m组（398.77±53.7

8、2，n=4）的基因表达量显著升高（P<0.01）；而