ifn-α在nk细胞抗小鼠肝纤维化作用中的机制

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1、分类号：R5575.2学校代码：10392学科专业代码：100201学号：2121003031硕士学位论文IFN-α在NK细胞抗小鼠肝纤维化作用中的机制TheRoleofNaturalKillerCellinIFN-α-MediatedAnti-fibrosisinaMouseModel学位类型：医学硕士所在学院：第一临床医学院申请人姓名：林晓瑾学科、专业：内科学（消化系病）导师：江家骥教授研究起止日期：2014年3月至2015年3月答辩委员会主席：陈君敏教授答辩日期：2015年05月28日福建医科大学硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3英汉缩略语名词对照⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7第一部分小鼠肝脏NK及HSC的提取、培养及鉴定材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16第二部分肝脏NK和HSC之间的相互作用机制材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21第三部分IFN-α对NK-HSC间的调控机制材料和方法⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49福建医科大学硕士学位论文NK细胞在IFN-α抗小鼠肝纤维化作用中的机制中文摘要研究背景和目的:活化的肝脏星状细胞（hepaticstellatecellsHSC）是肝纤维化进程中的核心细胞

4、，肝脏自然杀伤细胞（natrualkillcellNK）细胞介导的免疫反应是调控纤维化进程的重要因素之一，干扰素-α(interferon-αIFN-α)可免疫调控NK细胞功能。1.本实验通过建立不同阶段纤维化小鼠肝脏NK/HSC体外共培养体系，研究肝脏NK细胞和HSC细胞之间的相互作用机制，进一步阐明NK细胞抗纤维化的作用机制。2.通过IFN-α直接干预NK/HSC共培养体系，检测NK细胞的细胞毒性及分泌干扰素-γ（interferon-γIFN-γ）功能，阐明IFN-α抗纤维化的免疫学机制，为临床应用IFN-α提供实验室证据。研究方法:1.取

5、8周龄雄性C57BL/6J小鼠，腹腔注射四氯化碳（carbontetrachlorideCCL4）建立早期阶段（2周组）和晚期阶段（8周组）肝纤维化小鼠模型。不同密度梯度法提取不同纤维化阶段小鼠HSC，磁珠分选法提取不同纤维化阶段小鼠肝脏NK细胞，建立各组NK/HSC共培养体系。2.在各组共培养体系中加入抗小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（Tumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligandTRAIL）抗体、以抗小鼠NK细胞组2成员D（naturalkillergroup2memberDNKG2D

6、）抗体、抗小鼠IFN-γ抗体和抗小鼠转化因子β1（transforminggrowthfactorβ1TGF-β1）抗体，共培养24小时，LDH检测法检测不同纤维化阶段小鼠NK细胞的细胞毒性。ELISA检测不同阶段纤维化小鼠肝脏NK细胞的细胞分泌IFN-γ功能。3.IFN-α干预各组纤维化小鼠NK/HSC共培养体系及HSC独立培养组。LDH检测法检测不同纤维化阶段小鼠NK细胞的细胞毒性。ELISA法检测不同阶段纤维化小鼠肝脏NK细胞的细胞分泌功能。流式细胞术检测HSC凋亡率。结果：1.成功建立2周组（早期）、8周组（晚期）肝纤维化模型小鼠，并分离

7、、培养各组小鼠肝脏HSC和NK细胞，建立2周组、8周组NK/HSC共培养体系，加入相应抗体干预后，共培养24小时取得上清液。2、检测各组共培养体系的NK细胞毒性及分泌IFN-γ水平，得到以下结果：1）2周组小鼠肝脏NK/HSC共培养体系NK细胞毒性及分泌IFN-γ水平高于8周组(29.72%±0.49%1福建医科大学硕士学位论文VS17.52%±0.60p<0.01；24.27±0.68pg/mlVS13.48±0.37pg/mlp<0.01）；2）以抗小鼠TRAIL抗体、以抗小鼠NKG2D抗体、抗小鼠IFN-γ抗体干预2周组、8周组小鼠肝脏NK

8、/HSC共培养体系，其NK细胞毒性分泌IFN-γ水平均低于无抗体干预组(p<0.01)；3）以抗小鼠TGF-β1抗体干预2周组、8周组N