her-2在骨肉瘤中的表达及筛选其适配子方法的研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士专业学位论文论文题目HER-2在骨肉瘤中的表达及蹄选其适配子方法的研究研究生姓名—陈孜指导教师姓名徐又佳专业名称骨外科•研究方向骨肿瘤论文提交日期2015年5月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作

2、者签名：p^日期：苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年__月解密后适用本规定。非涉密论文口论

3、文作者签名：日期：少u导师签名：日期：HER-2在骨肉瘤中的表达及筛选其适配子方法的研究中文摘要HER-2在骨肉瘤中的表达及筛选其适配子方法的研究中文摘要目的：研究人表皮生长因子受体2（Her-2）在骨肉瘤中的表达情况，探讨其表达的临床意义，并且利用SELEX（systemevolutionofIigandsbyexponentialenrichment）技术筛选与HER2蛋白特异性结合的适配子（aptamer）。方法：1.采用免疫组化SP法检测80例骨肉瘤组织中HER-2的表达，比较不同的临床参数与HER-2表达的相关性。2.在证实了

4、HER-2与骨肉瘤发生发展有着关联的条件下，体外合成78个长度的碱基，并且含有35个随机寡核苷酸的ssDNA文库，次级ssDNA文库的制备是通过生物素-链亲和素磁珠系统分离法得到的，且HER2蛋白的适配子是以微孔为介质的SELEX正反筛法获得。同时，每轮ssDNA与靶蛋白HER2的亲和力是通过生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶系统检测，最后，将亲和力最高的适配子群进行克隆、测序。最后，适配体群的一级结构和二级结构要采用生物学软件DNAMAN进行分析，将亲和性最高的适配子做了进一步的特异性的检验。结果：1.共80例病理标本中，有61例骨肉

5、瘤组织中HER-2呈阳性表达，其阳性表达率为76.3%（61/80）；其中不同性别、年龄阶段，肿瘤发生部位、肿瘤直径大小病理组织中HER-2的表达未见差异，无统计学意义（P>0.05），而在患者TNM分期高和发生淋巴结转移的组织中HER-2表达显著，且差异具有统计学意义（P<0.05）。2.经过12轮的筛选，得到了适配体9号与HER2蛋白具有极高亲和力，其从从初始的0.18上升至0.86，提高了约5倍。特异性结果显示：9号适配子具有针对性，只与HER2蛋白具有较高的特异性。结论：1.HER-2在骨肉瘤中表达异常，与骨肉瘤的发生发展有关，

6、可作为骨肉瘤早期检测及评价预后的一个独立的生物学指标。2.经过多轮的筛选成功获得了特异性识别骨肉瘤HER2蛋白的单链DNA适配体，为骨肉瘤预后的诊断和治疗奠定了坚实的基础。I中文摘要HER-2在骨肉瘤中的表达及筛选其适配子方法的研究关键词：免疫组化；骨肉瘤；SELEX技术；DNA适配子；HER2；作者：陈孜指导教师：徐又佳IIResearchHER-2expressioninosteosarcomaandscreenedaptamermethodAbstractResearchHER-2expressioninosteosarcomaa

7、ndscreenedaptamermethodAbstractObjectives:ToinvestigatetheexpressionandsignificanceofHER-2inhumanosteosarcomatoustissue.AndscreeningwithHER2-specificbindingoligonucleicacidaptamersbySELEX.Methods:1.TheexpressionofHER-2inhumanOsteosarcomatissuewasassessedbystandardimmuno-

8、histo-chemicalstaining.relevanceofcomparingdifferentclinicalparametersandHER-2expression.2.Invitrosynth