gs-ac-camp-pka信号转导通路的表达与氟性骨损伤的关联

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1、单位代码：]〇66〇中图分类号:R599学号：10660S120093UDC：616学科专业代码V100402密级：公开^,••广Y>.%*4.Vr•.'责阳医学院2015居硕士学位论文(科学学位）Gs-AOcAMP-PKA信号转导通路的表达与氣性骨损伤的关联TheassociationbetweentheexpressionofGs-AC-cAMP-PKAsignaltransductionpathwayandskeletalfluorosis研究生：吴延莉导师：张华教授韦艳副教授年级：2012级专业:劳动卫生与环境卫生字二〇一五年三月中图分类号：R12单位

2、代码：10660UDC：614学号：10660S120093学科专业代码：100402密级：公开贵阳医学院2015届硕士学位论文（科学学位）Gs-AC-cAMP-PKA信号转导通路的表达与氟性骨损伤的关联TheassociationbetweentheexpressionofGs-AC-cAMP-PKAsignaltransductionpathwayandskeletalfluorosis论文作者：吴延莉指导教师：张华/教授韦艳/副教授申请学位：医学硕士培养单位：公共卫生学院学科专业：劳动卫生与环境卫生学研究方向：环境化学与生物因素与健康研究起止日期：201

3、3年3月至2015年1月论文评阅人：仇广乐教授李军副教授答辩委员会主席：仇广乐论文答辩日期：2015年5月18日二〇一五年II贵阳医学院学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。除与外单位合作项目将予以明确方式规定外，本研宄己发表与未发表成果的知识产权均归属贵阳医学院。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。1^年▽月^日入巧T年J月M日学位论文版权使

4、用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权贵阳医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“V”）：1、保密□，在_年解密后适用本授权书。2、不保寶JZfl导师签名（手写)作者签名（手写）：4广年r月vf日Gs-AC-cAMP-PKA信号转导通路的表达与氟性骨损伤的关联专业：劳动卫生与环境卫生学硕士研究生：吴延莉导师：张华/韦艳【摘要】目的：

5、采用UMR-106大鼠骨肉瘤细胞和Wistar大鼠为研究对象，从细胞到整体动物水平，全面分析氟中毒状态下，Gs与Gi调控的Gs-AC-cAMP-PKA信号转导通路各因子的表达变化，为进一步明确Gs-AC-cAMP-PKA信号通路在氟骨症中的作用奠定基础。方法：1.氟化钠对UMR-106细胞的影响及其与Gs/Gi-AC-cAMP-PKA信号通路表达的关系。（1）0、50、100、500、1000、5000、10000、20000、40000、80000mol/LNaF作用UMR-106细胞24h、48h，采用CCK-8法检测细胞的存活情况，明确后续实验作用浓度

6、及时间。（2）0、1000、2000、4000mol/LNaF作用UMR-106细胞24h后，磷酸苯二钠法检测ALP活性，流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况，qRT-PCR技术检测细胞内BGP、Gs、Gi、AC、PKAmRNA表达水平。2.氟化钠对Wistar大鼠骨组织中Gs/Gi-AC-cAMP-PKA信号转导通路表达影响。48只断乳2周Wistar大鼠按体重随机分为4组，分别为对照组（自来水）和低剂量组（50mg/LNaF）、中剂量组（150mg/LNaF）、高剂量组（250mg/LNaF），每组12只，雌雄各半。采用自由饮水方式染毒，连续染毒6个月。检测

7、大鼠尿氟、骨氟、牙氟及血清氟浓度及氟斑牙发生率；比色法检测大鼠骨组织中抑制羟自由基能力、CAT、GSH-Px、SOD的活力及ELISA方法检测8-OHdG、PCO、MDA、Gs、Gi、AC、cAMP、PKA的浓度。结果：1.氟化钠对UMR-106细胞的影响及其与Gs/Gi-AC-cAMP-PKA信号通路表达的关系（1）CCK-8检测结果：作用24h时，1000~80000µmol/LNaF组UMR-106细胞存活率较对照组低（P<0.05）；作用48h时，50~80000µmol/LNaF组UMR-106细胞存活率较对照组低（P<0.05）。确定后续实验作用浓

8、度为0、1000、2000、4000