egcg对小鼠合子基因组激活和干细胞因子sox2与oct4表达的影响

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1、分类号：Q954.4学校代码：10392学科专业代码：100101学号：2120102604硕士学位论文EGCG对小鼠合子基因组激活和干细胞因子Sox2与Oct4表达的影响TheeffectsofEGCGonmousezygoticgenomeactivationandtheexpressionofstemcellfactorsSox2andOct4学位类型：医学硕士所在学院：基础医学院申请人姓名：杜娟人体解剖与组织胚胎学学科、专业：（生殖与发育）导师：王世鄂教授研究起止日期：2013年2月至2015年4月答辩委员会主席：王玮教授答

2、辩日期：2015年05月28日二○一五年五月目录英语缩略语表…………………………………………………………1中文摘要………………………………………………………………2英文摘要………………………………………………………………5第一部分………………………………………………………………8第二部分…………………………………...……………………….31结论……………………..………………………………………44参考文献……………………………………………..………………45综述………………………………….………....………………49参考文献……

3、………………………………………..………………55致谢………………………………………….…………………58【福建省教育厅科技重点项目（JA09104）和福建省科技引导性项目（2015Y0021）资助】英语缩略语表缩略词英文全名中文译名KMKunming昆明（小鼠）EGCGEpigalloeateehin-3-gallate表没食子儿茶素没食子酸酯PMSGPregnancymareserumgonadotropin孕马血清促性腺激素hCGhumanchorionicgonadotropin人绒毛膜促性腺激素ZGAZygonicgeno

4、meactivation合子基因组激活eIF1Aeukaryotictranslationinitiationfactor1真核翻译起始因子1AMuERV-LEndogenousretrovirus-like鼠内源性逆转录病毒mRNAmessengerribonucleicacid信使RNAROSReactiveoxidespecies活性氧自由基PVAPolyvinylalcohol聚乙烯醇PVPPolyvinylpyrrolidone聚乙烯吡咯烷酮PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液1EGCG对小鼠合

5、子基因组激活和干细胞因子Sox2与Oct4表达的影响中文摘要目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对小鼠体外发育1-细胞胚至2-细胞胚过渡的影响，研究EGCG对小鼠合子基因组激活和干细胞因子Sox2与Oct4表达水平的改变，为进一步探讨EGCG影响小鼠植入前胚体外发育的机制提供实验和理论依据。方法：1.以空白M16培养液为对照组，在M16中添加浓度为10µg/ml、20µg/mlEGCG为实验组，收集昆明（kunming，KM）小鼠1-细胞胚（hCG后21h）。（1）进行体外连续培养，计数各组发育至2-细胞胚、4-细胞胚、桑

6、葚胚和囊胚的数目，并以1-细胞胚为基数，计算各组至不同阶段的发育率。（2）M16组及20µg/mlEGCG组的1-细胞胚体外培养至hCG后33h，利用荧光显微镜分别对磷酸化组蛋白H3阳性和阴性的1-细胞胚数量进行计数，同时在倒置显微镜下计数2-细胞胚数量，观察EGCG对1-细胞胚至2-细胞胚过渡的影响。。2.取hCG后21h1-细胞胚分别在M16及20µg/mlEGCG培养液中体外培养至hCG后27h，收集1-细胞胚。（1）激光扫描共聚焦显微镜检测eIF1A、ZSCAN4、SOX2和OCT4蛋白的表达定位情况。（2）Realtime

7、-PCR检测合子基因组激活相关基因eIF1A、Zscan4d、MuERV-L、Hsp70.1及干细胞因子Sox2与Oct4的mRNA水平。3.取hCG后27h1-细胞胚分别在M16及20µg/mlEGCG培养液中体外培养至hCG后45h，收集2-细胞胚。（1）激光扫描共聚焦显微镜检测eIF1A、ZSCAN4、SOX2和OCT4蛋2白的表达定位情况。（2）Realtime-PCR检测合子基因组激活相关基因eIF1A、Zscan4d、MuERV-L、Hsp70.1及干细胞因子Sox2与Oct4的mRNA水平。结果：1.添加EGCG实验组

8、的1-细胞胚体外培养各阶段的发育率明显高于M16组。添加20µg/mlEGCG的实验组1-细胞胚至2-细胞胚的过渡率明显高于对照组（P<0.01），且未到2-细胞胚的1-细胞胚发育至M期的比率也高于M16组（P<0.05）。2.体外培