d-丝氨酸在铅暴露致大鼠神经损伤中的实验研究

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1、中图分类号：R114论文编号：HBLG2015-049UDC：密级：公开硕士学位论文D-丝氨酸在铅暴露致大鼠神经损伤中的实验研究作者姓名：尹镜雯学科名称：公共卫生与预防医学研究方向：卫生毒理学学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年4月25日申请学位类别：医学硕士导师姓名：张艳淑教授单位：华北理工大学公共卫生学院论文评阅人：单位：单位：论文答辩日期：2015年6月8日答辩委员会主席：钱令嘉研究员2+关键词：铅暴露；海马；NMDA受体；D-丝氨酸；Ca；神经递质；唐山华北理工大学2015年6月TheRoleofD-serineinNerveInjuryofRatsI

2、nducedbyLeadExposureDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyYinJingwen(PublicHealthandPreventiveMedicine)Supervisor:ProfessorZhangYanshuJun,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加

3、以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签

4、名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的本研究通过建立D-丝氨酸（D-Ser）干预的铅暴露大鼠模型，观察大鼠海马2+组织中N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体表达、Ca浓度以及氨基酸类神经递质含量等方面的变化，初步阐明D-Ser对大鼠学习记忆功能的影响机制。方法1实验动物及分组：21天健康雄性SPF级SD大鼠60只，体重140-160g，适应性喂养一周后随机分为4组，分别为空白对照组（500mg/kg醋酸钠）、铅暴露组（500mg/kg醋酸铅+隔日生理盐水注射）、D-Ser低剂量组（500mg/kg醋酸铅+隔日30mg/kgD-Ser腹腔注射）、D-Ser高剂

5、量组（500mg/kg醋酸铅+隔日60mg/kgD-Ser腹腔注射）。采用自由饮水方式连续染毒8周。2应用Morris水迷宫进行神经行为学测试。3应用电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）分析大鼠组织中铅元素含量。4应用流式细胞术分析大鼠海马神经细胞凋亡率、海马细胞2+Ca浓度以及活性氧（ROS）含量。5应用HE染色法观察大鼠海马组织病理改变；6应用尼氏染色法观察大鼠海马神经元细胞及结构的变化。7应用透射电镜观察海马神经元细胞结构及形态的变化。8免疫组化方法观察大鼠海马组织中NR2A蛋白、NR2B蛋白表达的变化。9应用实时荧光定量PCR方法测定海马组织中NR2A蛋白、NR2B蛋白

6、及丝氨酸消旋酶（Srr）mRNA表达变化。10高效液相色谱法测定海马组织中4种氨基酸类神经递质（谷氨酸Glu、丝氨酸Ser、甘氨酸Gly、γ-氨基丁酸GABA）含量的变化。11统计学分析实验数据均采用均数±标准差（xs）表示，各组间比较采用单因素方差分析（OneWayANOVA），两两比较采用LSD检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。结果1实验大鼠的一般情况：在染毒期间，所有实验大鼠摄食和饮水量未见异常。饲养过程中，实验大鼠体重正常增长，各组体重增加变化无差异。2D-Ser干预对铅暴露大鼠学习记忆能力的影响：Morris水迷宫实验结果显示，与对照组比较，铅暴露组大鼠的逃逸

7、潜伏期增长（P＜0.05），穿台次数下降（P＜0.05）；与铅暴露组比较，D-Ser低剂量组与D-Ser高剂量组大鼠的逃逸潜伏期降低（P＜0.05），穿台次数增加（P＜0.05）。3D-Ser干预对铅暴露大鼠血液、海马和皮质中铅含量变化的影响：与对照组比较，铅暴露组大鼠海马组织铅含量是对照组大鼠海马组织铅含量的3.49倍；D-Ser低剂量组及D-Ser高剂量组大鼠海马组织中铅含量变化与铅暴露组比较无差异（P＞0.05）。同样，D-Ser低剂量组与D-Ser高剂量大鼠皮质、血液中铅