锂匹鲁卡品致痫大鼠杏仁核神经元损伤机制的实验研究

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1、锂-匹鲁卡品致痫大鼠杏仁核神经元损伤机制的实验研究作者：梁决寅孙建英冯延秋杨忠【关键词】锂-匹【摘要】目的观察锂-匹鲁卡品（LPC）致痫大鼠杏仁核神经元损伤的形态学改变，并检测细胞凋亡相关的DNA碎片标志物。方法用LPC诱发大鼠癫痫持续状态(statusepilepticus，SE)3h，于癫痫中止后第24小时和第48小时处死动物。一组鼠用于制作脑切片，分别用光镜和电镜观察；另一组从相同的脑区提取DNA，在含有溴乙锭的琼脂糖凝胶上电泳。注射了生理盐水的大鼠被用作阴性对照。结果在第24小时和第48小时两个时点，SE大鼠杏仁核神经元出现了形态学上的坏死和梯状DNA电泳带，对照组未见到坏死及凋

2、亡细胞。结论癫痫持续状态后，形态学上表现为坏死的神经元出现梯状DNA电泳带，提示在此模型中可能存在程序性细胞死亡的机制。【关键词】癫痫持续状态；凋亡；坏死；DNA梯状电泳带【Abstract】ObjectiveToobservethemorphologyofneuronaldeathinnucleusamygdalaeofratsafterstatusepilepticus(SE)inducedbylithium-pilocarpine(LPC),andcorrelatethiswithmarkersofDNAfragmentationthathasbeenassociatedwithc

3、ellularapoptosis.MethodsSEwasinducedfor3hourswithLPC.24or48hourslatertheratswerekilled.One9grouphadbrainsectionsstained，thenexaminedbylightandelectronmicroscopy.DNAwasextractedfromthesameareaandelectrophoresedonanagarosegelwithethidiumbromide.Thesameratsinjectedwithsalinewereusedasnegativecontrol

4、s.Results24and48hoursafterSE，wesawmorphologicallynecroticneuronsinnucleusamygdalae,aswellasDNAladder.Neitherapoptoticnornecroticneuronswereseeninratsinjectedwithsaline.ConclusionAfterSE,DNAladderwasseeninnucleusamygdalaewhereneuronsweremorphologicallynecrotic,whichsuggeststhatprogrammedcelldeathm

5、echanismsmaybeactivatedinthisSEmodel.【Keywords】statusepilepticus,apoptosis,necrosis,DNAladder癫痫持续状态(SE)可导致神经元死亡,尤其是边缘系统。曾有人认为痫性发作诱导的神经元死亡是凋亡，主要依据有TUNEL染色阳性和DNA梯状电泳带，然而，从目前所能得到的超微结构资料来看，SE后神经元的损伤以坏死为主［１，２］。因此，我们精确观察SE诱导的大鼠杏仁核神经元损伤超微形态学改变，并同时观测SE后杏仁核区DNA梯状电泳带，这对探讨SE后脑损伤的机制将提供最直接的证据。本研究还将进一步探讨DNA梯状电

6、泳带在SE后神经元损伤中的意义。1材料和方法91．1癫痫持续状态模型的建立健康成年雄性Wistar鼠40只，3~4月龄，体重250~300g（由山东大学动物实验中心提供）。笼养，自由进水、进食，室温保持在18~25℃。将大鼠随机分为两组：锂-匹鲁卡品组(A组)和生理盐水组(B组)，再分别进一步随机分为A1、A2组及B1、B2组；其中A1、B1为24h处理组，A2、B2为48h处理组。参照文献［３］将各组大鼠用苯巴比妥（45mg/kg）和氯胺酮（25mg/kg）麻醉（均采用腹腔注射），并同时在颅骨上于无菌操作下置入4根不锈钢电极，置入电极后第3天分别记录各组鼠的基础脑电图。参照Fujika

7、wa等实验方法［4］，给A组鼠腹腔内注射氯化锂（3mEq/kg）,24h后再注射匹鲁卡品（45mg/kg），诱发痫性发作。B组鼠给予等量生理盐水腹腔注射。当A组鼠出现典型的痫性发作后开始记录脑电图，并使痫性发作持续3h，然后腹腔注射安定（10mg/kg）以终止发作。在癫痫终止后第24小时和第48小时两个时点，腹腔注射苯巴比妥（200mg/kg），将两组动物麻醉。1．2显微镜检查的脑片制备将鼠麻醉后，用磷酸缓冲的2%多聚甲醛和0.1%